不同剂量碳重离子诱发水稻生物学效应特征研究-生物医学仪器与工程专业论文.docx

Classified Index: Q691.5 U.D.C: 577 Dissertation for the Doctoral Degree in Engineering STUDY ON CHARACTER OF BIOLOGICAL EFFECTS ON RICE INDUCED BY DIFFERENT DOSE OF CARBON HEAVY-ION RADIATION Candidate: Zhang Meng Supervisor: Prof. Sun Yeqing Academic Degree Applied for: Doctor of Engineering Specialty: Biomedical Sciences and Technology Affiliation: School of Life Science and Technology Date of Defence: March, 2012 Degree-Conferring-Institution: Harbin Institute of Technology 摘要 摘 要 I I 摘 要 大量的空间搭载研究表明，水稻是研究空间辐射生物学效应的一种较好的 模式生物材料。低剂量高能重离子地面模拟空间辐射辐照水稻种子，往往能够 诱导水稻当代植株的生长刺激效应，空间搭载有些水稻种子同样也出现这种刺 激效应。为进一步认识高能低剂量辐射生物学效应的剂量范围和作用机制，本 论文选用不同剂量（0、0.02、0.1、0.2、1、2、5、10、15 和 20Gy）的 12C 重 离子辐射（LET=27.3keV/μm）辐照水稻萌发种子，分别研究了辐射后水稻表型、 细胞生物学、基因组及基因组甲基化多态性、miRNAs 及其靶基因表达在不同 剂量下的变化规律，试图从多个层面解释这种高低剂量辐射造成的生长刺激与 抑制效应的机制。 本论文研究发现，受到不同剂量辐射的水稻表型，在不同的剂量范围表现 出明显不同的生物学效应，出现了以 2Gy 辐射剂量为分界点的一些表型变化特 征。当辐射剂量低于 2Gy 时，各辐射组水稻大约有 10%左右的死亡率，但不表 现出明显的剂量依赖关系；大于 2Gy 剂量辐射组水稻随剂量的增加，死亡率明 显增加，并且发现 20Gy 为半致死剂量（幼苗死亡率 50.29±1.01%）。水稻三叶 期株高的数据同样显示，当辐射剂量低于 2Gy 时，各辐射组株高平均值均高于 对照组，表现出生长刺激效应；而当剂量高于 2Gy 时，各辐射组株高均低于对 照组，出现了生长抑制。不论是生长抑制还是刺激，相对对照组差异都极其显 著（P0.01），这种高低剂量效应的分界点同样为 2Gy。连续观察分蘖期、孕穗 期、抽穗期、扬花期、灌浆期到成熟期的株高，发现株高抑制性状组在分蘖期 却出现了倒转，到成熟期（辐射后 120 天）时与低剂量的株高刺激组间差异消 除。从发育角度我们也观察到辐射组较对照组均出现抽穗率下降和抽穗期推迟 的现象，但高低剂量间差异不大。 为进一步分析高低剂量对水稻成活率和株高变化差异的生物学基础，本论 文采用透射电子显微镜技术，观察水稻幼苗辐照 24 小时后，不同剂量组的茎尖 分生组织叶肉细胞内叶绿体、线粒体、内质网、核糖体及细胞核的变化。结果 发现，当受到小于 2Gy 辐射后，各细胞器均未出现明显生理损伤，叶绿体数目 没有明显变化，但线粒体数量明显增多，并聚集在叶绿体和内质网附近；受到 哈尔滨工业大学工学博士学位论文 哈尔滨工业大学工学博士学位论文 II II 大于 2Gy 剂量辐射后，叶肉细胞内叶绿体发生明显损伤，并造成线粒体肿胀， 出现嵴模糊，并伴随基质空泡，叶绿体和线粒体损伤率显著增加（P0.01）。这 些现象说明，细胞生物学改变可能是造成以 2Gy 为界限的刺激和抑制效应的重 要原因之一。 为从基因组水平上分析高低剂量辐射造成的刺激效应和抑制效应的差异， 本论文进一步分析了受到 0.02、0.2、1、2 和 20Gy 剂量重离子辐射处理每组 5 个单株水稻基因组及基因组 DNA 甲基化多态性变化范围。研究发现，与对照 组相比，各剂量组水稻基因组多态性和基因组 CCGG 位点甲基化多态性都产生 了的增高，但高低剂量的变化趋势没有明显的差异。 为进一步探讨基因调控机制尤其是 miRNA 是否参与辐射诱水稻刺激和抑 制效应。本论文利用 μparaflo 芯片（254 个特异探针，V13.0 版）和 qRT-PCR 的方法，发现 miR156a 和 miR164a/c/d 的表达被特异诱导上调，其中 miR156a 和 miR164a/c/d 分别对应的靶基因 SPL3/7/9/11 和 NAC1/2，相对于对照组表达 量均显著下调（P 0.0