婴幼儿轮状病毒肠炎血清胃泌素、胃动素、血管活性肠肽水平的分析.pdfVIP

温州医学院硕士学位论文 含量。 2)测剂盒组成 ①缓冲液1瓶40ml ②EDTA溶液1瓶lOml ③抗胃泌素血清1瓶冻干品 ④125I一胃泌素2瓶冻干品或液体 ⑥胃泌素标准品5瓶冻干品，含25，60，150，400，1000pg／m1(ng／L) ⑥免疫分离剂1瓶lOOml 其中3—5项中的试剂于-20．jC贮存或冰冻保存，其余试剂2-8．【2保存。 3)试剂配制 ①胃泌素标准品：每瓶加入1．Oml缓冲液溶解。 ②胃泌素抗血清：每瓶加入5．Oml缓冲液溶解。 ③125I一胃泌素：每瓶加入5．Oml缓冲液溶解。 4)操作步骤：如表l 表i：按下表加样和操作：单位：微升 NBS SO Sl—S5 样品 混．．4℃ 分离剂 缓冲液 200 100 放置24h 1000 EDTA溶液 100 100 100 100 任取三管 1000 胃泌素标准品 100 测放射性 1000 样品 100 计数。求 1000 1251一胃泌素 100 100 100 100 平均值为 1000 抗胃泌素血清 100 100 100 总T(CPM)1000 然后，3500转／分，离心15分钟，弃上清，测沉淀的放射性计数(CPM)。 5)计算结果 计算标准和样品的相对结合百分率： X100 B／BO％=(B-NBS)／(BO—NBS)XCPM 以B／Bo％为纵坐标，标准浓度横坐标，在半对数坐标纸或Logit-log坐标纸上作图， 得出标准曲线。根据样品的B／Bo％值从标准曲线上查出相应的剂量值。 6)特征数值：灵敏度：lOng／L；重复性：批内变异1096，批间变异15％。 8 温州医学院硕士学位论文 (2)、血浆胃动素浓度测定 1)检测原理：(同胃泌素) 2)测剂盒组成及配制 ①缓冲液(PBS)1瓶。 ②MTL抗血清2瓶(冻干品)：加PBS3．Oml溶解。 ③125I一～ITLl瓶(冻干品)：加PBS5．Oml溶解。 1600pg／ml(ng／L) ⑤分离剂(PR试剂)1瓶(液体)：临用前充分遥匀。 ⑥抑肽酶(4万KIT／m1)1．5ml／瓶。 1．5ml／瓶。 ⑦7．5％乙二胺四乙酸二钠(EDTA．2Na) 3)测定方法：如表2 表2：MTL RIA加样程序(u1) NBS S0液 S1-$5 样品 PBS 200 100 MTL标准品 100 待测样品 100 MTL抗体 100 100 100 充分混匀，4℃放置24h 125I-WfL 100 100 100 100 充分混匀，412放置24h PR分离剂 500 500 500 500 充分混匀，室温放置20min。离心3500rpm20min，弃上清测沉淀cpm数。 4)计算结果 以B／BO计算NBS、SO结合百分率，以B／BO计算标准待澳4样品结合百分率，在 半对数坐标纸上绘制标准曲线，并查出