葛根素对小鼠胚胎干细胞分化的心肌细胞影响的研究-生理学专业论文.docxVIP

独创性生声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除文中已标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个 人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体， 均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：  日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交文论的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将论文的全部和部分内容编入有关数据库进行 检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本论文属于 保密 [ ]，在 年解密后使用本授权书。 不保密 [ ] （请在以上 [ ]打“√） 学位论文作者签名： 指导教师签名： 日期： 年 月 日 日期： 年 月 目 录 HYPERLINK \l _bookmark0 摘 要1 HYPERLINK \l _bookmark1 Abstract 2 HYPERLINK \l _bookmark2 前 言4 HYPERLINK \l _bookmark3 材料和方法 7 HYPERLINK \l _bookmark4 结 果15 HYPERLINK \l _bookmark5 讨 论22 HYPERLINK \l _bookmark6 结 论24 HYPERLINK \l _bookmark7 参考文献 25 HYPERLINK \l _bookmark8 综 述28 HYPERLINK \l _bookmark9 致 谢42 华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 1 PAGE 1 葛根素对小鼠胚胎干细胞分化为 心肌细胞影响的研究 摘 要 目的 ： 探 讨 葛 根 素 对 体 外 分 化 的 小 鼠 胚 胎 干 细 胞 源 心肌细胞 (murine embryonic stem cells-derived cardiomyocytes, mESC-CMs)(D3 系) 成熟度的影响。 方法：采用经典的悬滴－悬浮－贴壁三步法诱导 mESCs 向心肌细胞的分化， 并在分化过程中持续用葛根素（100μm/l）处理。收集分化第 10 天、第 16 天和 第 20 天胚体(embryonic bodies, EBs)，分别作为早期(early developmental stage, EDS)，中期(middle developmental stage, MDS)，晚期(late developmental stage, LDS)EBs 进行实验。采用流式细胞术检测心肌细胞的分化比率；RT-PCR 测定钙 操纵相关蛋白 ryanodine 受体(Ryanodine receptor, RyR)、贮钙素(calsiquestrin, CSQ)、Ca2+-ATP 酶(sarco/endoplasmic reticulum calcium-ATPase 2a, SERCA2a)、 磷酸受 磷 蛋白 (phospholamban, PLB) 和 钠 钙 交 换 体 (sodium-calcium exchanger, NCX）的 mRNA 表达情况；全细胞膜片钳技术记录心肌细胞的动作电位。 结果：分化第 9 天贴壁的 EBs 出现跳动区域，提示心肌分化。流式细胞术结 果提示 mESC-CMs 比例随分化进程逐渐增加。RT-PCR 结果显示，早、中、晚期 mESC-CMs 均有 RyR、CSQ、SERCA2a、PLB 和 NCX 的 mRNA 表达，CSQ 的 mRNA 表达随着分化进程逐渐增加，NCX 的 mRNA 表达随着分化逐渐减弱，然 而 SERCA2a、RyR 和 PLB 的 mRNA 表达没有显著分化依赖性变化。葛根素处理 明显上调中晚期 CSQ 的 mRNA 表达和早期 SERCA2a 的 mRNA 表达，然而对 RyR、PLB 和 NCX 的 mRNA 表达无显著影响。全细胞膜片钳记录分化中期 mESC-CMs 的动作电位，可见起搏样、心房肌样和心室肌样三种动作电位。 结论：葛根素能上调早期 mESC-CMs SERCA2a 的 mRNA 表达和中晚期 CSQ mRNA 表达，提示葛根素可能促进 mESC-CMs 的成熟。 关键词：胚胎干细胞；心肌细胞；葛根素；成熟度 The study of effect of puerarin on the mouse embryonic stem cell derived cardiomyocytes