葛根素预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制探讨-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2011 届硕士研究生毕业论文 PAGE PAGE 10 葛根素预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制探讨 病理学与病理生理学 研究生：林安晓 导师：陆德琴 教授 摘要 目的 探讨葛根素预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用机制是否通过 改变 eNOS 蛋白表达及其磷酸化，以及可能的信号传导通路。方法 成年雄性 SD 大鼠 90 只，随机分为 5 组，每组 18 只，分别是假手术(Sham)组、缺血再灌注(Control) 组、葛根素预处理(PUE)组、LY294002(LY)组、LY294002+葛根素(LY+PUE)组。 采用开胸结扎左冠状动脉前降支(LAD)的方法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模 型，缺血 45min，再灌注 120min。经 BL-420E 生物机能实验系统分别测定缺血 前、缺血 45min 以及再灌注 60min、120min 时的左心室收缩压(Left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒张末压(Left ventrieular end diastolic pressure， LVEDP)、左室内压变化最大上升和下降速率(Maximum rate of left ventricular pressure development and decay，±dp/dtmax)。再灌注结束后用 1%TTC（2，3，5— 氯化三苯基四氮唑）染色测定各组心肌梗死面积。采用 ELISA 试剂盒测定血浆 肌酸激酶(CK-MB)活力和血浆肌钙蛋白 I(cTnI)浓度水平。采用 Western Blot 方法 分别检测各组心脏缺血区与非缺血区 eNOS 总蛋白表达、eNOS Ser1179 位点、 eNOS Ser635 位点、eNOS Thr497 位点的磷酸化水平，Akt 总蛋白表达和 Akt Thr308 位点、Akt Ser473 位点的磷酸化水平。采用化学比色法检测心肌组织 NO 的含量。 结果 与 Sham 组比较，Control 组各时间点心肌收缩及舒张功能逐渐 降低，心肌梗死面积增加，血浆 CK-MB、cTnI 含量明显升高（P0.05）；与 Control 组比较，PUE 组各时间点心肌收缩及舒张功能降低程度明显减轻，心肌梗死面 积明显减少，血浆 CK-MB、cTnI 含量明显降低（P0.05）。在心肌缺血区，与 Sham 组比较，Control 组 Akt Thr308、Ser473 的磷酸化水平显著升高（P0.05）， 而 eNOS、Akt 总蛋白表达及其 eNOS Ser1179、Ser635、Thr497 位点的磷酸化水 平差异无统计学意义；与 Control 组比较，PUE 组 eNOS Ser1179、Ser635，Akt Thr308、Ser473 的磷酸化水平显著升高（P0.05）；LY+PUE 组较 PUE 组 eNOS Ser1179、Akt Thr308、Ser473 磷酸化水平下降（P0.05），而 PUE 组和 LY+PUE 组两组 eNOS Ser635 磷酸化水平差异无统计学意义；各组间 eNOS、Akt 总蛋白 表达及 eNOS Thr497 磷酸化水平差异无统计学意义。在心肌非缺血区，LY 组、 LY+PUE 组较其他 3 组 eNOS Ser1179 及 Akt Thr308、Ser473 磷酸化水平显著下 降（P0.05）；各组间 eNOS、Akt 总蛋白表达及 eNOS Ser635、Thr497 磷酸化水 平差异无统计学意义。结论：葛根素预处理对缺血再灌注大鼠心肌的保护作用机 制与其增加缺血区心肌组织 eNOS Ser1179、Ser635 的磷酸化有关。PI3K/Akt 信 号通路参与了葛根素保护缺血再灌注心肌的过程，Akt 被活化后，使 eNOS Ser1179 位点磷酸化水平升高、eNOS 活性增强。另外，葛根素预处理还可升高 eNOS Ser635 位点磷酸化水平，使 eNOS 活性增强，起到心肌保护作用，但其信 号转导通路还需进一步研究。 关键词：葛根素；心肌缺血再灌注损伤；内皮型一氧化氮合酶；磷酸化调控； 一氧化氮；大鼠 1 前言 组织缺血一定时间、一定程度，可引起组织细胞损伤，血液的重新灌注是 防止损伤、使组织细胞存活的必要措施。冠状动脉供血量不足时，可引起心肌发 生缺血。近年来，随着人们对心血管疾病研究的不断深入，在缺血性心脏病的治 疗方面取得了很大的进展，溶栓疗法、冠脉搭桥术，心脏介入术等治疗方法使心 肌组织在缺血后得到血液再灌注，患者死亡率明显地下降；然而，再灌注具有两 重性，有时心肌缺血后再灌注不仅不能使其功能得到恢复，反而加重了功能障碍 和结构损伤，心肌细胞从可逆