茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立.pdfVIP

abe-农业学报JournalofSouthern 2016，47(3)：332—336 Agriculture ISSN2095—1 NNXAAB 191；CODEN 191．2016．03．332 DOI：10．3969，j：issn．2095—1 茭白线粒体蛋白双向电泳体系建立 杜传来1，罗海波，彭 昕2，王韦华3，郁志芳3 (1安徽科技学院食品药品学院，安徽凤阳233100；2浙江医药高等专科学校食品学院，浙江宁波315100 3南京农业大学食品科技学院。南京210095) 摘要：【目的】建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系，为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质 组学研究提供参考。【方法】以茭白为试验材料，比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条pH范围及蛋白上样量等条 对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白，17cm、pH3～10的口G胶 条，1．0 5～8的IPG胶条对茭白线粒体蛋 布在pH乱8范围内，pH3~4和pH8～lo范围内蛋白点较少；进一步选用pH4~7和pH 白进行双向电泳，分离效果均明显提高，且pH4～7范围内口G胶条的双向电泳图谱清晰，蛋白点分辨率较高。分别采 用0．8、1．0和1．2 mg3个不同的上样量进行双向电泳，结果表明上样量为1．0mg时，电泳图谱质量最好。【结论】通过 差速离心联合Percoll不连续密度梯度离心提取纯化茭白线粒体，并控制好双向电泳体系的pH范围、上样量等因素， 可获得蛋白质点清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。 关键词：茭白；线粒体；双向电泳；蛋白质组学 中图分类号：Q81 文献标志码：A Establishmentoftwo-dimensional for electrophoresissystem mitochondrialofZizanialatifolia proteins DU Chuan—lail，LUOHai—b02+，PENGXin2，WANGWei—hua3，YU Zhi—fan93 ofFoodandDrug，AnhuiScience (1College andTechnologyUniversity，Fengyang，Anhui Food Pharmaceutical ofFoodScience Science，ZhejiangCollege，Ningbo，Zhejiang315100，China；3College Technology，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing210095，China) wasconductedtoestablishtwo—dimensional Abstract：【0bjective】Thepresentexperiment temsuitablefor mitochondrialof乃砌ialatifolia．inorderto refereneeforfurther analysing proteomies