第四章 微生物细胞和酶固定化技术.ppt

第四章 酶和细胞固定化技术 河北科技大学生工学院 崔建东 cjd007cn@163.com 酶和细胞固定化技术 酶和细胞固定化技术 酶和细胞固定化技术 酶和细胞固定化技术 如果你是工程技术人员，领导要你解决这个问题，你怎么办 酶和细胞固定化技术 固定化酶的定义 通过物理的或化学的手段，将酶束缚于水不溶的载体上，或将酶柬缚在一定的空间内，限制酶分子的自由流动，但能使酶充分发挥催化作用；过去曾称其为水不溶酶或固相酶。 细胞和酶固定化技术 什么是固定化酶？ 细胞和酶固定化技术 固定化酶的发展历史 细胞和酶固定化技术 固定化酶的优点 （1）易将固定化酶与底物、产物分开；产物溶液中没有酶的残留，简化了提纯工艺。 (2) 可以在较长时间内反复使用，有利工艺的连续化、管道化。 (3) 酶反应过程可以严格控制，有利于工艺自动化和微电脑化。 细胞和酶固定化技术 固定化酶的优点 (4) 在绝大多数情况下提高酶的稳定性。 (5) 较能适应于多酶反应。 (6) 酶的使用效率提高，产物得率提高，产品质量有保障，成本低。 细胞和酶固定化技术 固定化酶应用实例 细胞和酶固定化技术 细胞和酶固定化技术 固定化酶的缺点 (1) 酶固定化时酶的活力有所损失。同时也增加了固定化的成本。 (2) 比较适应水溶性底物和小分子底物。 (3) 与完整细胞比较，不适于多酶反应． 细胞和酶固定化技术 细胞和酶固定化技术 固定化酶 1、吸附法 通过载体表面和酶分子表面间的次级键相互作用而达到固定目的的方法。 只需将酶液与具有活泼表面的吸附剂接触，再经洗涤除去未吸附的酶便能制得固定化酶。是最简单的固定化技术，在经济上也最具有吸引力。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 1、吸附法 （1）物理吸附法 通过氢键、疏水作用和电子亲和力等物理作用，将酶固定于水不溶裁体上，制成固定化酶。 载体包括：有机载体（纤维素、果胶原、火棉胶及面筋、淀粉等），无机载体（氧化铅、皂土、白土、高岭土、多孔玻璃、氧化钻等）。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 1、吸附法 （1）物理吸附法 酶活力损失少，但酶和载体的结合不稳定，容易脱落。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 1、吸附法 （2）离子交换吸附法 这是将酶与含有离子交换剂的水不溶载体相结合而达到固定化的一种方法。常用的载体有阴离子交换剂（如四乙氨基乙基-纤维素、混合胺类-纤维素等），阳离子交换剂（羧甲基-纤维素、纤维素柠檬酸盐、 DEAE-葡聚糖凝胶等）。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 1、吸附法 （2）离子交换吸附法 这种吸附法较为牢固，所以应用比较广泛。 世界第一例获得工业应用的固定化酶是 DEAE-Sephadex A-25吸附的氨基酰化酶反应用于DL-AA的光学分析。 细胞和酶固定化技术 影响酶蛋白在载体上吸附程度的因素: 1. pH：影响载体和酶的电荷变化,从而影响酶吸附。 2.离子强度：多方面的影响，一般认为盐阻止吸附。 3.蛋白质浓度：若吸附剂的量固定，随蛋白质浓度 增加，吸附量也增加，直至饱和。 4. 温度：蛋白质往往是随温度上升而减少吸附。 5. 吸附速度：蛋白质在固体载体上的吸附速度要比 小分子慢得多。 6. 载体：对于非多孔性载体，则颗粒越小吸附力越 强。多孔性载体，要考虑吸附对象的大小和总吸附面积的大小。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 2、包埋法 将酶包埋在多孔载体内部而制成固定化酶的方法称为包埋法。 包埋法可分为凝胶包埋法、半透膜包埋法和微囊化包埋法。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 2、包埋法 凝胶包埋法（胶格包埋法） 以各种多孔凝胶为载体，将酶包埋在凝胶的微孔内而使酶固定化的方法称为凝胶包埋法。 常用的凝胶有琼脂凝胶、海藻酸钙、角叉菜胶、明胶等天然凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂等合成凝胶。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 2、包埋法 半透膜包埋法 半透膜包埋法是将酶包埋在由各种高分子聚合物制成的小球内，制成固定化酶。 常用于制备固定化酶的半透膜有聚酰胺膜、火棉胶膜等。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 2、包埋法 微囊化包埋法 微囊法主要将酶封装在胶囊、脂质体和中空纤维中。胶囊和脂质体主要用于医学治疗，中空纤维主要适于工业使用 。 微生物细胞和酶固定化技术 包埋法的优点、缺点 包埋法的优点在于它是一种反应条件温和、很少改变酶结构但是又较牢固的固定化方法。 包埋法的缺点是只有小分子底物和产物可以通过高聚物网架扩散，对那些底物和产物是大分子的酶并不适合。这是由于高聚物网架会对大分子物质产生扩散阻力导致固定化酶动力学行为改变，使活力降低。 细胞和酶固定化技术 固定化酶 3、共价结合（偶