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鸭精液冷冻保存技术研究 第一章 文献综述 1 精液冷冻保存技术研究进展 1.1精液冷冻保存研究意义 精液冷冻是在常规人工授精的基础上发展起来的一种精液保存技术，是人工授精技 术的一项重大革新。精液冷冻保存 (semenfreezing)是利用液氮 (一工%℃)、干冰 一〔 790C)或其他冷源将精液经过适当处理后，保存在超低温下，抑制精子的代谢活动，使 精子的生命得以在静止状态下保持下来，以达到长期保存精液的目的。一旦需要时使之 复温一解冻，重新获得活力0 由于冷冻精液的长久保存性，使精液的使用、选种、选配、杂交改良和国际间的精 液交换得以更方便的实行，打破了精液使用的时空限制，极大地扩大了优秀公畜禽使用 范围和年限，对优秀遗传基因的迅速扩散，改进畜禽生产性能起了巨大的推动作用。以 精液体外保存为基础的人工授精技术的广泛应用已经加速了动物的遗传选择并使生产 性能得到极大提高，在奶牛上尤其明显。在实验室条件下，精液的冷冻保存在动物辅助 繁殖技术 (如体外受精)等方面也得到了广泛的应用，主要应用于人类生殖、濒危物种 的保种、实验动物的遗传工程等[[21 1.2精液冷冻保存研究概况 精液冷冻技术最早可追溯到1787年，意大利的生理学家Spallanzanei将人和马的精 液在一17℃进行了最初冷冻尝试。Luget和Hodepp(1938)报道，将蛙的精液加入高渗 的浓糖液使精子部分脱水，使其在盖玻板上散布成薄层，然后投入液态空气中(一192 ℃)迅速冻结，快速解冻后发现有活精子2[91.Ja工net(1938)报道了用干冰 (一79C) 冷冻精子40天，后投放在一196℃保存52小时，再在一269℃保存5小时后仍有部分精 子存活3[1 Shaffne:等[301(1941)报道，在冷冻前用高渗果糖溶液稀释鸡精液，用固态C仇 和酒精混合物使精液迅速降温到一79*C，在 14个月保存后，解冻后发现，鸡精子的活 力很有限，只有30%的精子恢复。Shaffner等[31]在1942报道，在鸡的精液中加果糖溶 液，在试管中冷冻后精子仍具有受精能力，给母鸡输精后所产48枚卵中有12枚受精， 但这些胚胎都在10-15h发育后死亡。Hoagland和Pincus(1942)试用各种快速冷冻 法冷冻小白鼠、兔子、豚鼠、公牛和人的精液，结果人的精子有百分之十几到二十存活， 牛和兔精子只有个别存活，其它精子则多数死亡4[[1 1949年，Polge在冷冻鸡精液试验中偶然发现了甘油对鸡精子的冷冻保护作用[[321 精液的冷冻保存取得了突破性的发展，这是低温生物学发展的一个里程碑，从而开创了 第一章 文献综述 精液冷冻的新纪元。此后许多研究者开展了精液冷冻方面的研究试验。1951年首次获 得冷冻精子人工授精的牛犊。Smith和Polgel1(1950)进行了牛和山羊精液的低温冷 冻保存，Emmens和Blackshaw(343(1950)进行了绵羊精液在一79℃下的低温冷冻保 存，但是受胎率极低。1953年干冰中 -〔78C)保存的人精子通过人工授精使病人怀 孕，10年后液氮 (一1960C)冷冻人精子获得成功。小鼠精子对冷冻损伤特别敏感，直 到90年代才出现用冷冻精子人工授精获得小鼠的报道 (Tada等1111,1990)。目前大熊猫 等珍贵濒危动物精子的冻存研究也得到开展 (陈大元等151，1992). 进入二十世纪六十年代以来，生物化学与细胞生物学的相互渗透与结合，分子生物 学与低温生物学的快速发展，使人们对精子结构与功能的研究达到了前所未有的高度， 为精液冷冻保存的发展奠定了扎实的理论基础。但是，对于家禽精液冷冻来说，由于禽 类精子的特殊性，使家禽精液的冷冻保存与哺乳动物相比，还有较大的差距。随着细胞 超微结构和其他学科的不断发展，必将推动家禽精液冷冻保存技术得到发展和完善。 1.3精液冷冻保存的机理 1.3.1概 论 精液冷冻保存技术属于低温生物学的范畴，因此，对其机理的阐明也应从低温生物 学的角度去寻找答案。但是目前对精液冷冻保存基础理论的研究仍不深入，只是通过实 践摸索精液冷冻的方法来提高其品质。而对精液在冷冻，解冻过程所发生的变化及其受 冻害的机理，还不十分了解。 上世纪30年代，Bnauet提出了冷冻状态下细胞原生质发生玻璃硬化的假说，所以 在30到40年代，人们根据溶液的玻璃态学说，