屋尘螨过敏原Der p 37克隆表达及其致敏哮喘机制的研究.pdfVIP

屋尘螨过敏原Derp37克隆表达及其致敏哮喘机制的研究 摘 要 背景：尘螨是全球常见的一种室内过敏原，它们的分泌物、排泄物和皮壳碎片等以 尘埃颗粒的形式飞扬于空气中，是导致过敏性疾病的一种重要过敏原。国内外现将可以 引起人体产生过敏反应的尘螨主要区分为几类，其中以屋尘螨和粉尘螨最为常见。屋尘 螨过敏原的组成十分丰富，除了主要过敏原以外，还包括许多次要过敏原，它们的生物 学特性和致敏机制都尚不清楚。在本研究中，我们利用大肠杆菌原核表达系统克隆表达 出屋尘螨过敏原Derp37 蛋白，并通过亲和层析得到了较高纯度浓度的重组Derp37 蛋 白，并鉴定其免疫原性，再通过动物实验建立小鼠模型来证实了Derp37 蛋白是一种新 过敏原，并通过转录组测序探讨了Derp37 的致敏机制。 目的：克隆表达屋尘螨过敏原Derp37 蛋白，鉴定其免疫原性，探究其致敏机制。 方法： （1）利用原核表达系统克隆表达，经亲和层析纯化后获得较为纯净的重组 Derp37；（2）利用生物信息学分析，使用病人血清进行酶联免疫吸附实验（ELISA）、 蛋白免疫印迹（westernblot）检测重组蛋白Derp37 的免疫原性；（3）通过动物模型 证实重组Derp37 蛋白的致敏性；（4）转录组测序探讨Derp37 蛋白的致敏机制。 结果： （1）通过大肠杆菌原核表达系统，成功克隆表达纯化出较高浓度和纯度的 重组屋尘螨过敏原Derp37 蛋白，通过与尘螨过敏患者血清的ELISA 和westernblot 实 验，证明Derp37 具有致敏性，与血清结合率约为 16.7%，是一种屋尘螨次要过敏原； （2）通过构建Derp37 过敏性哮喘小鼠模型，Derp37 能使小鼠血清特异性IgE 升高， 同时Th2型细胞因子IL-4 表达水平升高，另外还有IL-17水平显著升高；同时小鼠肺泡 灌洗液内中性粒细胞增多，肺组织病理切片显示小鼠肺部炎细胞浸润、黏液高分泌，表 明Derp37 蛋白能够诱导小鼠产生过敏性哮喘；（3）通过转录组测序分析，Derp37 致敏小鼠与正常空白小鼠有多个基因存在上调或下调的改变，且大多数基因都与免疫相 关，其中IL-17基因差异明显；通过KEGG途径分析也显示，Derp37对IL-17 信号通 路产生了明显的改变，证实Derp37 诱导小鼠过敏性哮喘的机制与IL-17 和Th17 I 屋尘螨过敏原Derp37克隆表达及其致敏哮喘机制的研究 相关。 结论：利用原核系统成功克隆表达纯化了屋尘螨过敏原Derp37，并通过动物实验 证实了重组Derp37 蛋白可诱导过敏性哮喘，Derp37 蛋白的致敏机制除了与IL-4 和 Th2相关以外还与IL-17 和Th17相关，表明Derp37 是一种新的尘螨次要过敏原。 关键词：尘螨过敏原；过敏性哮喘；Derp37；屋尘螨 II CloningandExpressionofHouseDustMiteAllergenDerp37andtheAllergicAsthmaMechanism Abstract Background：Dust mite is a common indoor allergen in the world. Their secretions, excretions,andskinshellfragmentsfloatintheairintheformofdustparticles,whichisan importantallergencausingallergicdiseases.Thedustmitesthatcancauseallergicreactions in human body are mainly divided into several categories at home and abroad, of which DermatophagoidesfarinaeandDermatophagoidespteronyssinusarethemostcommon.The allergencompositionofhousedustmiteisveryrich，includingmany