食物中胡萝卜素的测定方法.docxVIP

食物中胡萝卜素的测定方法⑴ 杨月欣教授 等 一，纸层析法 .原理 以丙醐和石油酰提取食物中的胡萝卜素及其他植物色索，以石油酸为展开剂进行纸层析，胡萝卜素极 性最小，移动速度最?快,从而与其他色素分离，剪下含胡萝卜素的区带，洗脱后于450nm波长下定量测定。 .适用范围 参照GB12389-90。本方法适用于植物性食物和含有植物性食物的混合食物中胡剪卜索的测定，其最小 检出限为Ugo .仪器和设备 （1） 实验室常用设备。 （2） 玻璃层析缸。 （3） 分光光度计。 （4） 旋转蒸发器：具150印1球形瓶。 （5） 恒温水浴锅。 （6） 皂化回悔装置。 （7） 点样器或微量注射器。 （8） 滤纸。 4.试剂 除特殊说明外，实验用试剂为分析纯，水为蒸僧水。 （1） 石油醒（沸程30?60C）:同时是展开剂。 （2） 无水硫酸钠：分析纯。 （3） 5%硫酸钠溶液。 （4） 1 + 1 化钾溶液：取50g敏氧化钾溶于50ml水。 （5） 无水乙醇：需脱醛处理。 检验乙醇是否含醛： 银象液：加浓鼠水于阈硝酸银液中，直至貌化银沉淀溶解，加入化钠溶液数滴，如发生沉淀， 再加浓敏水使之溶解。 b、 眼镜反应：加2ml 液于试管内，加入几滴乙醇摇句，加入少许mol/LM^化钠溶液加热。如乙醇 中无醛，则没有银沉淀，否则有银镜反应。 脱醛方法：取2g硝酸银溶于少量水中，取4g氢级化钠溶于温乙醇中，将两者倾入1L乙醇中，摇匀，挣 置一、两天，将上层清液倾入蒸悔瓶中，蒸情，弃去初蒸的50ml° （注：蒸饵速度控制在1滴/秒。） （6） 胡萝卜素标准贮备液：取5mg8-胡萝卜素标准品，溶于1 Oml三氯甲烷中，浓度约为500 pg/mL 准确测其浓度。 标定：取标准溶液U1,加正己烷，混句。剥］其吸光度值，比色杯厚度为1cm,以正己烷为空白，入 射光波长450nm,平行测定三份，取均值。 计算公式： A 1 式中：XI—胡豪卜素标准溶液浓度，mg/ml； A 一吸光值： E —B胡萝卜素在正己垸溶液中，入射光波长450nni,比色杯厚度1cm,溶液浓度为Ippm的吸光系数，为: 11000 1 1000 将ppm换算成mg/ml； 测定过程中稀释倍数的换算。 （注：配制标准溶液时，应注意标准品的结构是胡萝卜素还是胡萝卜素脂。通常标准品不能完全溶解于有 机溶剂中，尤其是胡弟卜素醋，所以必要时应先将标准品进行皂化，再用有机溶剂提取，用蒸馆水洗涤至 中性后，浓缩定容。再进行标定。由于胡萝卜素很容易分解破坏，所以每次使用前标准品均需标定，且测 定样品时需带标准品同步果作。） （7） B-胡萝卜素标准工作液：将已标定的标准液用石油酿准礁稀释，使每亲升溶液相当50ug,避光保 存于冰箱中。待续 食物中胡萝卜素的测定方法（2） 杨月欣教授等 5 .操作步骤 样品的采集和处理 （1）粮食：样品用水洗三次，置60笔烤箱中拷干，磨粉，储于塑料瓶中，放一小包棒脑精，盖紧瓶塞保 存，备用。 （2）蔬菜与其他植物性食物：取可食都用水冲洗三次后，用纱布吸去水滴，切碎，用句浆器制成匀浆, 贮于塑料瓶中，冰箱内保存备用。 浏定步骤（以下步骤箝在准光条件下进行） （1）样品提取：取适量样品，相当于原样1?5g（含胡萝卜索约20-80 ug ）句浆，粮食样品祝其胡萝卜 素含量而定，置100ml带塞笑形瓶中，加入丙酮20nd,石油酰5nd,振摇Imin,静置5min,将提取液技入 盛有100nd 5%硫酸钠溶液的分液漏斗中，再于锥形瓶中加入10而丙酮一石油醒混合液，振摇Imin,静置 5min,将提取液并入分液漏斗中。如此提取2?3次，直至提取液无色为止。 植物油和高脂肪样品：需先皂化，取适量样品（＜10g）,加脱醛乙醇30ml,再加10ml 1:1々.氧化钾溶液, 回流加热30min,然后用冰水使之迅速冷却，，皂化后样品用石油酰提取，直至提取液无色为止。 （注：原国标方法中，不是所有的样品均进行皂化处理。但是许多植物性样品由于细胞壁较厚，在句浆或 研磨过程中不易完全破坏，使胡萝卜素无法完全释放。并且尽管植物性样品中脂肪含量较少，但仍含有一 定脂质成分，如果不进行皂化，会出现提取不完全和提取时出现乳化现象：浓缩时残留脂质，使定容体积 不准确；纸层析展开不完全，造成测定结果偏移。所以建议除酒类、饮料外所有样品均进行皂化处理。） （2）洗涤：将提取液静置分层，弃去下层水溶液，反使用5%琉唆钠溶液振摇洗涤，每次约15mL直至下 层水溶液清亮为止。 将皂化后样品提取液用水洗涤至中性。 将提取液通过盛有10g无水疏酸钠的小漏斗?漏入球形瓶，用少量石油酝分数次洗净分液漏斗和无水疏酸 钠层内的色素，洗涤液并入球形瓶内。（注：经过无水硫酸钠辅助过滤，提取液中应不含水分。） （3） 浓缩与定容：将上述球形瓶