食品免疫学 课件 14 免疫学技术原理及免疫非标记技术.ppt

第十四章 免疫学技术原理及免疫学非标记技术 第一节 免疫学技术原理 第二节 免疫学非标记技术 Chapter 14 Principles of immunological techniques and immunological nonlabeling techniques 第一节 免疫学技术原理 抗原-抗体反应（antigen-antibody reaction）是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合的反应。体外的抗原抗体反应，是免疫学检测技术的重要基础。 静电引力: 带相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的作用。 范德华力:抗原抗体相互接近时，分子极化作用发生的一种吸引力。 氢键:抗原分子中的氢原子和抗体分子中电负性大的原子如氮、氧等相互吸引而形成。 疏水作用力:抗原与抗体分子表面上的疏水基团相互接触，由于相互排斥水分子，在两者之间产生相互吸引力而发生结合。 一、抗原抗体反应的原理 二、抗原抗体反应特点 特异性、比例性 可逆性、阶段性 四个特点 特异性：抗原与抗体结合反应的专一性 抗原抗体反应特异性示意图 分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间化学结构和空间构型的互补。 1、特异性 可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性。 影响因素： 抗体对相应抗原的亲和力－亲和力越高，结合越牢固，越不易解离 环境因素对复合物的影响－pH、离子强度 2、可逆性 前 带：抗体过量 后 带：抗原过量 等价带：抗原抗体比例合适 比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系 3、比例性 第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见。 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象。 4、阶段性 第二节 免疫学非标记技术 抗原-抗体反应类型 反应类型 实验技术 非 标 记 凝集反应 直接凝集试验、间接凝集试验、间接抑制凝集试验、协同凝集试验 沉淀反应 液相内凝集试验、凝胶内凝集试验 中和反应 病毒中和试验、毒素中和试验 补体参与的反应 补体溶血试验、补体结合试验 标 记 标记免疫反应 荧光免疫技术 放射免疫技术 酶免疫技术 发光免疫技术 金免疫技术 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成肉眼可见的凝集块现象，称为凝聚反应。 一、凝集反应（agglutination） 用于凝集反应中的抗原称凝集原(agglutinogen)。 用于凝集反应中的抗体称凝集素（agglutinin)。 颗粒抗原与抗体直接结合 玻片法：细菌及ABO血型鉴定 试管法：定量，可用于检测滴度（效价）。 1. 直接凝集反应 抗原（或抗体）吸附于载体+相应抗体（或抗原）→凝集 常用载体：乳胶颗粒、羊红细胞 2. 间接凝集反应 二、沉淀反应(precipitation) 沉淀反应指可溶性抗原与其相应的抗体在合适条件下反应并出现沉淀物的现象。 用于沉淀反应中的抗原称沉淀原(precipitonogen)。 用于沉淀反应中的抗体称沉淀素（precipitin) 。 1. 液相内沉淀 絮状沉淀反应：抗原抗体溶液混合，在电解质存在下，两者结合出现可见的絮状沉淀。 环状沉淀反应：小试管内，下层沉淀素与上层沉淀原在界面应，形成白色沉淀环。 絮状沉淀 环状沉淀 （1）单向琼脂扩散试验 2. 凝胶内沉淀 是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正比相关。 是将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，二者自由向周围扩散并相遇，在比例合适处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法常用于抗原或抗体的定性、组成和两种抗原相关性分析的检测。 （2）双向免疫扩散 （3） 免疫电泳 将单向免疫扩散与电泳技术结合，可快速测定标本中可溶性抗原的含量。 火箭免疫电泳 电泳+免疫单扩散 对流免疫电泳 电泳+免疫双扩散 简便、快速，敏感度比双向琼脂扩散试验高8~16倍 三、中和试验（neutrolization assay） 类似酸碱中和、互相抵消，当毒素或病毒与对应的抗体结合时，毒素和病毒的致病性大大下降甚至消失，这种抗原抗体反应称为中和试验，用于中和试验的抗体可以称为中和抗体，能够中和毒素的抗体则可称为抗毒素。 四、补体参与的反应 此类反应是利用抗体与红细胞表面相应抗原结合后，使反应体系中补体激活导致红细胞破坏，出现溶血现象建立的。 本章小结 1 掌握抗原抗体反应原理 2 熟悉抗