小建中汤配伍不同糖类方对胃溃疡模型小鼠影响的比较研究.docxVIP

小建中汤配伍不同糖类方对胃溃疡模型小鼠影响的比较研究 小建中汤是“中风”之一。“中风脉连续两天，心烦意乱，小坚中汤是大师。”其作用既温中补虚,又益气养血 1 实验材料和设备 1.1 实验动物中心提供 昆明种小鼠70只,体质量(20±2)g,雌雄各半,由山东中医药大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鲁动物实验室标准规范化饲养,光照、温度、湿度适宜,自由进食、饮水。 1.2 小建中汤药物剂量算例 桂枝、芍药、大枣、甘草,购自山东中医药大学中鲁医院;生姜、饴糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖,购自济南漱玉平民大药店。西咪替丁(每片0.2 g,批,由山东仁和堂药业有限公司生产。小建中汤中药物比例严格按照张仲景《伤寒论》的药物剂量和要求,小鼠药物使用量根据不同种类动物之间药物剂量换算法进行换算。称取饴糖7.73 g(葡萄糖7.73 g或白砂糖7.73 g或乳糖7.73 g)、芍药18.56 g、桂枝9.28 g、甘草6.19 g、大枣20.40 g、生姜9.28 g,除饴糖或其他糖类外,将其余5种药物按上述剂量浸泡30 min,煎煮两次,每次30 min,加入饴糖或其他糖类,用双层纱布过滤去渣后经水浴蒸发制成每毫升含1 g生药的水煎液(浓度为100%),高温灭菌后在4℃冰箱保存备用。 1.3 紫外分光光度计 台式高速冷冻离心机(上海赛默飞世尔科技有限公司);显微镜测微尺(上海光学仪器厂);WFZ UV-2100型紫外分光光度计(上海尤尼柯仪器有限公司)。 超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批丙二醛(MDA)试剂盒,南京建成生物工程研究所,批无水乙醇,分析纯AR,批二甲苯,分析纯AR,批 2 实验方法 2.1 灌胃小建中汤、西咪替丁的造模方法 将70只健康小鼠随机分为7组,分别为小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组、小建中汤白砂糖组、小建中汤乳糖组、空白对照组、胃溃疡模型组和西咪替丁对照组,每组10只。其中小建中汤饴糖组、小建中汤白砂糖组、小建中汤乳糖组、小建中汤葡萄糖组分别按0.25 m L/10 g灌胃小建中汤配伍相应糖类方药液,西咪替丁对照组等体积灌胃西咪替丁(88 mg/m L)药液,空白对照组、胃溃疡模型组灌胃等体积生理盐水;每日定时灌胃1次,连续灌胃7 d,末次给药前禁食24 h但不禁水,在末次给药1 h后使用灌胃无水乙醇每只0.3 m L,建立小鼠胃溃疡模型。 2.2 小鼠血清sod、mda的检测 灌胃无水乙醇1 h后,摘眼球取血1 m L,4 000 r/min离心20 min,分离血清,4℃冰箱留存备用,用于检测血清SOD、MDA的含量。之后脱颈椎处死小鼠,解剖取胃,结扎幽门及贲门并经胃壁向胃腔内注入10%中性甲醛2 m L,摘除整个胃置于10%中性甲醛溶液中固定10 min。从幽门沿胃大弯剪开,用生理盐水冲洗后,将胃展平于玻片上,在装有物镜测微尺的显微镜下观察胃黏膜的组织学变化。 2.3 腺区胃黏膜损伤程度 在显微镜下观察胃黏膜的组织学变化,并用物镜测微尺测定溃疡指数、计算溃疡抑制率。测定胃腺区胃黏膜损伤的程度:(1)溃疡面长度和宽度均大于1 mm者,测量最大长度和宽度,并相乘,记分;(2)溃疡面长度大于1 mm,宽度小于1 mm者,测量长度,并记分。(3)长度和宽度均小于1 mm者记1分。将计分相加即为该动物的溃疡指数。计算溃疡抑制率: 2.4 光镜标本的制作 全胃置10%中性甲醛溶液室温固定48 h,按照组织修整,洗涤,脱水,透明,浸蜡,包埋,切片,脱蜡,苏木素—伊红染色,脱水,透明,封片的步骤制作光镜标本。用显微镜观察,并拍摄镜下照片。 2.5 影响大鼠血清sod和mda水平的影响 按照试剂盒说明书,分别用WST-1法和TBA法检测血清。 2.6 统计分析方法 应用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计分析,数据以ue0af±s表示,用单因素方差进行组间检验、分析,判断其差异显著性,取α=0.05为检验水准。 3 结果 3.1 溃疡指数的统计 由表1可知,胃溃疡模型组与空白对照组比较差异存在显著性,有统计学意义(P0.01)。小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组和西咪替丁对照组与胃溃疡模型组比较,溃疡指数显著降低;小建中汤白砂糖组、小建中汤乳糖组与胃溃疡模型组比较,溃疡指数无显著性差异。小建中汤饴糖组、小建中汤葡萄糖组、小建中汤白砂糖组和小建中汤乳糖组对溃疡的抑制率分别为24.90%、20.37%、15.43%和5.15%。 3.2 小鼠胃黏膜变化 空白对照组小鼠胃黏膜表面光滑平整呈正常状态,无明显黏膜出血、溃疡。胃溃疡模型组、小建中汤白砂糖组和小建中汤乳糖组小鼠胃黏膜有不同程度的损