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多肽adwx-1在大鼠体内的药动态变化 类风湿性关节炎（ra）是一种以关节滑膜炎为特征的慢性全身免疫性疾病。主要临床表现为关节早僵硬、疼痛、肿胀和障碍。近年的研究表明T细胞表面钾通道Kv1.3是治疗T细胞介导自身免疫性疾病的药物靶标, 钾通道Kv1.3调制剂特别是动物毒素多肽可以治疗多发性硬化症、Ⅰ型糖尿病、类风湿性关节炎、银屑病、延迟型过敏反应 蝎活性多肽ADWX-1是我国创新设计靶向T细胞钾离子通道Kv1.3的治疗风湿性关节炎多肽类候选药物, 分子质量为3.9 k, 作用于钾通道Kv1.3的活性为1.8 pM。它是目前公开报道作用钾通道Kv1.3选择性最强的多肽 (作用钾通道Kv1.1的IC 本研究使用氯胺-T法将 SD大鼠皮下单次给予不同剂量的ADWX-1后大鼠血浆中ADWX-1浓度, 应用DAS软件处理, 进行药代动力学参数分析, 为进一步研究奠定基础。 1 1.1 材料表面 1.1.1 主要试剂 ADWX-1多肽, 冻干粉, 纯度99.0% (批号(4-1) (4-2) ) , 上海新生源医药研究有限公司提供; 1.1.2 动物 SD大鼠, 清洁级, 雌雄各半, 体重220±20 g, 购自浙江省实验动物中心, 合格证号:SCXK (浙) 1.1.3 碘化钾ki 三氯乙酸 (TCA) , 江苏永华精细化学品有限公司;肝素, 上海蓝季科技发展有限公司, 批号:090725;碘化钾 (KI) , 分析纯, 南京化学试剂有限公司;牛血清白蛋白 (BSA) , 上海惠兴生化试剂有限公司, 批号:070108;0.9%氯化钠注射液, 四川科伦药业股份有限公司, 批号:L1091016 B;空白大鼠血浆, 自制。 1.1.4 仪器 SN- 695B型智能放免γ测量仪 (上海原子核研究所日环仪器一厂, 对 1.2 实验方法 1.2.1 adwx-1生物活性检测 I-ADWX-1的放射化学纯度测定 将 I-ADWX-1的生物活性测定 由武汉大学生命科学院用全细胞膜片钳法测定, 在相同条件下比较1 nmol/L ADWX-1与 1.2.2 标准曲线、稳定性和准确度 测定方法:精密移取待测样品 (质控) 溶液100 μL, 置于放免管中 (各浓度均复管测量) , 使用SN- 695Bγ测量仪测定各管的放射性计数60 s;再向以上各管中加入等体积20%三氯乙酸 (TCA) , 涡旋45 s, 4 000 r/min离心15 min, 弃上清, 沉淀再用SN- 695Bγ测量仪测定各管的放射性计数60 s。 标准曲线及测量范围:精密称取多肽ADWX-1适量, 用0.9% NaCl注射液配置成25 μg/mL (其中含 精密移取A液100 μL与900 μL空白血浆混合, 定容至1 mL, 得到浓度为2 500 ng/mL的标准溶液①, 将上述标准溶液依次用空白血浆等比稀释, 配制成浓度分别为:1 250 ng/mL, 625 ng/mL, 313 ng/mL, 156 ng/mL, 78 ng/mL, 39 ng/mL的ADWX-1标准品溶液, 分别标号为②-⑦。测定方法同上, 以ADWX-1浓度 (C) 作为横坐标、沉淀后放射性计数 (cpm) 为纵坐标进行线性回归, 绘制标准曲线。 精密度及准确度:精密移取A液适量, 用空白大鼠血浆稀释成终浓度为2 000 ng/mL, 313 ng/mL, 78 ng/mL质控溶液, 每个浓度各5个样品, 同批次测量, 测量方法同上, 计算日内精密度;同法连续测定3批, 计算日间精密度。 稳定性考察:精密移取A液适量, 用空白大鼠血浆稀释成终浓度为2 000 ng/mL, 313 ng/mL, 78 ng/mL质控溶液, 分别考察其在室温放置0, 1, 2, 4, 8 h;4 ℃条件下保存0, 8, 24, 48 h;-20 ℃条件下保存0, 1, 2, 4 d;反复冻融0, 1, 2, 3次后的稳定性变化情况, 测定方法同上。稳定性结果以测定浓度相对于设定浓度或者相对于0 h时测定浓度的残余百分数表示, 计算公式为:残余百分数 (%) =测定浓度/加入浓度或者0 h测定浓度×100。 1.2.3 脏器的注射 取清洁级SD大鼠18只随机分成3组, 每组6只 (雌雄各半) , 给药前12 h禁食、自由饮水, 并腹腔注射1% KI溶液0.5 mL封闭甲状腺。分别腹部皮下注射给予高 (200 μg/kg) 、中 (100 μg/kg) 、低 (50 μg/kg) 剂量的ADWX-1 (其中高、中、低剂量均含 2 2.1 生物活性测定 不同时段 由以上结果可知:3个标记物中, (2) 标记物 (峰顶段) 效果最好, 其放射化学纯度为96.77%