大花蕙兰无菌播种与组培快繁技术研究.docxVIP

? ? 大花蕙兰无菌播种与组培快繁技术研究 ? ? 李茂娟， 谭柏韬， 邓少华， 王华龙 (郴州市林业科学研究所， 湖南 郴州 423000) 大花蕙兰无菌播种与组培快繁技术研究 李茂娟， 谭柏韬， 邓少华， 王华龙 (郴州市林业科学研究所， 湖南 郴州 423000) 对大花蕙兰的无菌播种及组培快繁技术进行了相关研究。结果表明：大花蕙兰无菌播种采用0.1%升汞溶液灭菌10min能取得较好的效果；改良MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L培养基对假鳞茎诱导原球茎效果较好，其原球茎诱导率可达86%；原球茎增殖的最佳培养基为改良MS+NAA0.5mg/L,此配方对大花蕙兰的壮苗生根同样合适；采用固、液培养基交替培养(振荡转数100～110r/min)能有效地促进原球茎增殖；移栽基质配比为腐殖土∶棉籽壳=1∶1时，移栽苗成活率可达95%。 大花蕙兰； 无菌播种； 组培快繁； 原球茎； 交替培养 大花蕙兰(Cymbidiumgrandiflorium)是兰科兰属中的一部分大花附生种类及其杂交种，是世界上栽培最普及的洋兰之一，具有雍容华贵的外貌和色彩鲜艳的花朵，享有“兰花皇后”的美誉，深受兰花爱好者的欢迎，具有较大的市场潜力[1]。大花蕙兰种子众多而小，且多数发育不完全，常规播种难以萌发。传统繁殖方式是分株繁殖，但繁殖系数低且容易引起退化。因此，研究大花蕙兰组培快繁技术，对于解决市场需求，实现大花蕙兰的规模化生产具有重大意义[2]。 1 材料与方法 1.1试验材料 大花蕙兰供试种子和供试植株均来源于郴州市林业科学研究所花卉中心苗圃。 1.2试验方法 1.2.1 无菌播种诱导原球茎 取大花蕙兰蒴果冲洗干净后，在超净工作台内用75%酒精浸泡30s，然后分别用2%次氯酸钠，10%过氧化氢，0.1%升汞溶液处理[3]，处理时间分别为8、10、12min，接着用无菌水冲洗6～8次，再用无菌手术刀将蒴果剖开，将其中的种子均匀撒在相同配方的培养基上(MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1mg/L)，每个处理重复3次，观察种子污染率、原球茎诱导率状况。 1.2.2 假鳞茎诱导原球茎 采用大花蕙兰健康植株的假鳞茎作为外植体，经自来水冲洗干净后，用75%酒精浸泡约30s后放入0.1%升汞溶液中杀菌10min，然后用无菌水冲洗6～8次。在无菌的条件下将假鳞茎切割成5×5mm大小的团块，将它们分别接种到3种不同的基本培养基MS、1/2MS及改良MS上培养(均添加6-BA 0.5mg/L，NAA 0.1mg/L)，观察原球茎诱导情况。确定最佳基本培养基后，再使用不同的激素配方6-BA(0.5、1.0、1.5mg/L)、NAA(0.1、0.2、0.5 mg/L)进行培养，每个处理重复3次，统计诱导率。 1.2.3 原球茎的增殖培养 经3～4周培养，将外植体周围产生原球茎团块分切后进行继代培养，可形成更多的原球茎，分别添加椰乳(5%、10%)、香蕉汁(5%、10%)、6-BA(0.5、1.0mg/L)，NAA(0.1、0.5mg/L)作为培养物进行试验比对[4]。此外，原球茎的增殖培养方式采用了液体振荡培养，固体培养及固、液体交替培养三种不同的培养方式进行。其中，固、液交替培养即采用固体培养基培养20d后转入液体培养基振荡培养20d，再转入固体培养基培养，依次循环。液体振荡培养采用不同转数(60～70、100～110、130～140r/min)，其他条件同上，每个处理重复3次，统计增殖系数。 1.2.4 生根与移栽 采用改良MS培养基添加不同浓度NAA(0.1、0.5mg/L)和IBA(0.1、0.5mg/L)，研究最佳生根配方。待根生长到2～3cm左右，将装有试管苗的罐头瓶打开移出恒温室进行炼苗，7d后，取出试管苗，洗净根际的培养基，分别移栽入不同的基质中(腐殖土∶沙土=1∶1，腐殖土∶棉籽壳=1∶1，腐殖土∶珍珠岩=1∶1，腐殖土∶松针=2∶1)，并在相同的环境条件下培植，每个处理重复3次，筛选最佳的移栽基质。 以上室内试验的培养基分别加入7.5g/L的琼脂、20g/L蔗糖，pH值5.4～5.6，置于25±2℃的温室中进行培养，期间每天补充1500～2000lx光照(利用日光灯补光)12～14h。 2 结果与分析 2.1不同消毒液及消毒时间对无菌播种的影响 消毒处理是无菌播种的第一步，对大花蕙兰的组织培养研究有着至关重要的作用，消毒方法和时间得当，可以减少外植体的污染和材料的损失。从表1可以看出，在相同培养基配方下，使用3种不同的溶液消毒，随着处理时间的延长，污染率均有明显的减少，但是原球茎的诱导率也相对降低。其中，污染率最低的是使用2%次氯酸钠与0.1%升汞消毒12min，污染率均为16%；原球茎诱导率最高的是使用0.1%升汞处理1