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注射用克林霉素磷酸酯的安全性评价 克林霉注射液是由山东诚创制药有限公司和海口康立元制药有限公司联合开发的新药。由于其良好的脂溶性，其活性成分的利用率高于克林霉菌。本文通过实验探讨以细菌内毒素检查法取代热原(兔)检查法的可行性。 1. 实验材料 1.1 设备和设备 旋涡混合器(H-92)福州产,电热恒温水溶锅上海产,精密移液器和无热原枪头,均按中国药典2000年版规定处理。 1.2 试剂 1.2.1 试剂tal 1.2.1. 1.晋江安迪斯生物有限公司生产 批号为0103011 灵敏度标示值λb=0.25EU-mL-1 批号为0105013 灵敏度标示值λb=0.125EU-mL-1 1.2.1. 2、福州新北生物工程有限公司生产 批号为010628 灵敏度标示值λb=0.25EU-mL-1 批号为010318 灵敏度标示值λb=0.125EU-mL-1 1.2.2 内毒素检测用水 批号为0104240,每支2ml,内毒素含量0.015EU-mL-1 湛江安度斯生物有限公司产 1.2.3 标准物质 批号为2000-4,每支120EU,中国药品生物制品检定所。 1.3 样品 注射用克林霉素磷酸酯 批号为011001;011002;011003; 海口康力元制药有限公司生产 2. 方法和结果 2.1 试剂本身测试 按中国药典2000年版附录细菌内毒素检查法,结果见表1: 2.2 采用克林霉磷酸酯对细菌内毒素检查的干扰试验 2.2.1 细菌内毒素理论限值 本品入用每公斤体重每小时最大注射量(M)为20mg/(kg·h),细菌内毒素阈值(K)为5EU/(kg·h),细菌内毒素理论限值(L)=K/M=0.25EU/mg。 参考USP24中克林霉素磷酸酯的规定为0.58USPEU/mg。扣出中西方人体重差异,定为0.25EU/mg(高于USP中的规定)。 2.2.2 菌内毒素对照 选择灵敏度λb=0.25EU-mL-1的鲎试剂,用细菌内毒素检查用水(BET)配制一系列浓度以级数为梯度的供试品溶液,溶解鲎试剂,每个浓度取2管,各加入2λ的内毒素溶液0.1ml,同时做2管阴性对照,结果见表2 2.2.3 凝集无抑制作用 表2的试验结果表明,PPC全部为阳性,该供试品对TAL与细菌内毒素凝集无抑制作用。另取3批经热原检查合格的供试品用λb=0.25EU-mL-1,λb=0.125EU-mL-1的TAL,按中国药典2000年版二部附录细菌内毒素检查法供试品干扰试验项下操作,结果见表3 2.3 加标回相检查 用λb=0.25,0.125的TAL对供试品分别作细菌内毒素检查,并按不同灵敏度对供试品作相的稀释,同时增加1支阳性对照管。按中国药典2000年版二部附录细菌内毒素检查法,共检查20批注射用克林霉素磷酸酯冻干粉针,结果全部与热原检查结果相符。 3. 供试品浓度范围 试验是评价样品的浓度及性质对TAL与内毒素凝集反应的干扰程度及性质,以便筛选出对检查无干扰的供试品浓度范围,从表3结果可看出,样品对TAL的凝集无干扰作用,符合中国药典2000年版二部附录细菌内毒素检查法中供试品干扰试验规定的范围0.5-2λ。但以λb=0.125的TAL对供试品作2倍稀释后检查最可靠。各反应值为0.125。