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精子形态对辅助生殖技术治疗前助孕效果的影响 根据世界卫生组织的统计数据，世界上10%15%的已婚女性存在生产障碍，其中男性因素引起的不育超过一半。这些生育力低下或不育的患者需要临床治疗来建立妊娠,但常规的手术、药物或激素治疗,对相当一部分不育患者的治疗效果不明显。目前人类生殖临床多趋向于借助辅助生育技术治疗不育症,其中以体外受精(in vitro fertilization, IVF)和卵胞浆精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)的治疗效率高。 精液常规分析(包括精子密度、精子活动率、精子活动力等)是临床上评价男性生育能力的主要检查项目,但是,人类精液常规分析受各种因素的影响,变化较大,因此目前尚无一种可以确切评价男性生育能力的方法,临床上往往采用一组精液检测结果综合分析而作出判断。精子形态学分析是近年来才在我国逐渐被重视的用于评价男性生育力的检测指标之一,精子形态的分类最初由Macleod 等于1951年提出。 一直以来,精子形态在男性不育症中所起的作用尚存争议。研究显示:精子形态与其功能密切相关,任何精子形态上的缺陷都将导致其功能下降,影响男性生育力。精子头部缺陷,如大头精子、不定形头畸形精子运动速度慢,不能到达输卵管,无法与卵子结合;位于精子头部的顶体异常可使精子丧失受精能力,导致不育。有研究认为精子形态可为辅助生殖技术提供有效的预测信息,比精子密度、运动性等参数更能在受孕中起预测作用;形态正常精子百分率与受孕有直接关系,形态异常精子受精率、受孕率明显降低。但是,也有研究认为精子的形态与IVF的受精结果无关。 1999年WHO提出了严格的精子形态评估标准,目前国内很少有报道探讨采用这一标准进行的精子形态学分析结果与IVF中受精率、胚胎发育及妊娠结局等之间的关系。笔者对2008年1月至12月在中信湘雅生殖与遗传专科医院生殖中心接受体外受精治疗的夫妇进行筛选后,采用WHO第4版的精液质量分析标准,对患者或供精者精液进行了分析,回顾性分析精子形态对体外受精率、卵裂率及妊娠结局的影响,以探讨精子形态学分析在男性不育症诊断及辅助生殖治疗中的意义。 1 对象和方法 1.1 患者vf718周期 接受辅助生殖治疗的患者1 369周期,其中患者IVF490周期,供精IVF618周期,患者ICSI 261周期。严格筛选以排除女性不孕因素对卵子质量、受精、卵裂、着床等的影响,选择女方年龄35岁、各项检测指标正常或仅为输卵管阻塞的、非不明原因不育的、知情同意的1 369对夫妇。 1.2 方法 1.2.1 精密度检测 受检者禁欲3~7 d,在中信湘雅生殖与遗传专科医院取精室通过手淫方法采集精液后置于干净的一次性取精杯中,立即在37 ℃恒温箱中静置,待其完全液化后进行检测。 1.2.2 正常精子形态的判断标准 取液化精液0.5 mL, 加入生理盐水1 mL,5 000 r/min、3 min离心2次去除精浆。用生理盐水调整精子密度至(40~60)×106/mL,取20 μL于清洁的载玻片上,均匀涂片后待其自然干燥,采用WHO第4版推荐的改良巴氏染色方法进行染色,油镜下计数200个或以上精子的形态,求出每份精液样本的正常精子形态百分率。改良巴氏染色法将头、颈、中段和尾部均正常的精子判定为正常形态精子,即头部椭圆形,精子头部长度为4.0~5.0 μm,宽为2.5~3.5 μm,长宽之比为1.50~1.75;顶体界限清晰,占头部的40%~70%;中段稍细,宽度1 μm,约为头部长度的1.5倍;尾部直、均一,比中段细,非卷曲,长度约为45 μm;如有胞浆小滴须大于正常头部大小的一半。根据这个分类标准,所有形态学处于临界状态的精子均为异常。异常精子包括顶体过小、顶体过大、梨形头、圆形头、锥形头、不规则形头、头部空泡、颈部粗、颈部非对称性的接在头部、尾部弯曲(90°)、尾部卷曲等。按正常形态精子百分率≤5.0%,5.1%~10.0%,10.0%~15.0%和15.0%将751对夫妇分为4组,供精者(618周期)精子也分为4组(14.1%~17.0%,17.1%~19.0%,19.1%~23.0%和23.0%)。 1.2.3 穿刺取卵术方法 女方采用GnRH-a(促性腺激素释放激素激动剂)/FSH(促卵泡激素)/HCG(人绒毛膜促性腺激素)长方案或短方案促超排卵,体外受精方法根据精液情况采用IVF或ICSI。卵泡发育成熟后,肌注HCG 10 000 U,32~36 h后在阴道B超引导下行穿刺取卵术。卵子预培养4 h后受精,受精后16~18 h观察原核情况,受精42 h后观察卵裂情况,移植2~3个形态学评分最佳的胚胎入子宫,剩余有发育潜能的胚胎行冷冻保存。第2天开始行黄体支持治疗。移植4周后B超检查见孕囊及胚芽诊