井冈霉素发酵工艺中染菌的控制.docxVIP

井冈霉素发酵工艺中染菌的控制 井冈山素对预防和控制水稻条纹疾病具有特别的特色，可用于水稻水稻病虫害的防治，以及小麦干燥、小麦干燥、蔬菜干燥、根腐、棉花、豆类干燥、水稻小粒菌的核心疾病，以及玉米大斑点病、玉米旱病、玉米穗腐病和黑麦粉病的防治。此外，井冈霉还被推广到其他作物的抗病性控制中。井冈霉生产工艺中最困难的问题是细菌的污染。细菌不仅会造成大量原材料的浪费，还会影响产品的外观和内部质量，从而增加后续处理的难度，造成巨大的损失。 1 材料和方法 1.1 发酵缸及附属设施 井冈霉素菌种(湖南益阳生物化工有限公司);5 t种子罐;50 t发酵缸及附属设施;生物显微镜;效价检测采用GB/T9553-93标准;糖用费林检测法;氮采用甲醛法检测. 1.2 方法 1.2.1 培养条件保证染色 种子带菌主要发生在种子制备时,在一般情况下,只要注意接种无菌操作,加强 无菌管理,保证无菌室的卫生要求,染菌的机率就不高.培养基带菌采取蒸汽灭菌, 灭菌不彻底是染菌的原因;灭菌前,杂菌种类多,数量大(如表1),要严格控制蒸汽灭菌的温度和时间. 1.2.2 发酵设备及其附件渗透剂 井冈霉素生产为机械搅拌通风发酵型式,采用间歇灭菌发酵设备及其附件,大都是静止设备,虽不太容易损坏,但由于化学腐蚀和接触磨蚀等原因,发酵设备及其附件产生渗漏而引起染菌,占总染菌21.6%.具体控制措施见表2. 1.2.3 棉纺过滤介质的运行注意事项 空气净化系统导致染菌, 占总染菌的18.9%,应采取的防止措施: 1)油渗入空气:改用无油润的压缩机. 2)列管式冷却器穿孔:加强设备维修保养,定期检查,定期清理,减少积垢. 3)过滤介质松动,空气走短路:选用质量好,富有弹性的棉花,颗粒活性碳须过筛,装填过滤介质时应注意将棉花活性碳压紧,铺得均匀平整,定期检查、更换. 4)过滤介质被水润湿:灭菌时,夹层蒸汽出口疏水器堵塞,冷凝水无法排除,夹层失去加热作用,这样过滤器灭菌时内壁仍然会析出冷凝水,沾湿过滤介质;灭菌操作不当使过滤介质受潮;工艺管理不当,使过滤介质受潮;更换过滤介质. 5)过滤介质老化:多次加热灭菌;时间过长;工艺管理不当,温度过高;更换过滤介质.发酵罐上的新装置应考虑有减少染菌的保护措施,否则很难找出染菌原因,解决染菌问题.另外,由于空气除菌效率尚不够高,故空气带菌仍然是井冈霉素发酵染菌的主要原因. 1.2.4 蒸汽灭菌 1 反渗透膜蒸汽的制备 t种子罐作试验,灭菌时,蒸汽自三路进入种子罐,灭菌时改变三路蒸汽的进汽量,得出如下结论:当发酵罐底部进入的蒸汽少于取样管口,多于空气入口,灭菌难以彻底,染 菌率显著增加.当反过来试验时,情况恰好相反.井冈霉素生产的培养基会有发泡性物质,泡沫是发酵的大敌,泡沫中窝藏杂菌.如果三路蒸汽控制不好,如放料管进汽过猛,会引起培养基产生大量泡沫.防止的方法是把握好灭菌的进出蒸汽量,加入适量的消泡剂(0.3%),染菌率降低了6.0%(表3). 2 接收点适合于某设备非接反应的适合生产设备的适合生产设备的适合该模型的可以防止操作 t发酵罐的11次因死角造成染菌的原因分析,蒸汽灭菌不彻底而导致染菌占总染菌的27.0%,发现这种死角大都是培养基和其他物料的某部分,设备、管道的某部分,还有些死角是在维修、安装更换设备时,因操作不慎造成的,如焊接死角,法兰连接等形成的死角.得死角位置和防止措施见表4. 2 结果与分析 2.1 积极控制染菌 分析染菌原因,总结染菌的教训,把发酵染菌控制在生产前,防患于未然是积极控制染菌的最重要措施.纵观以往生产的经验总结,发酵染菌原因都是比较清楚的,对此而采取的措施也是有效的,但是在实际生产中发酵染菌率仍然比较高,可以说,这种现象大多是由于工作中“马虎凑合”. 2.2 未染菌效价分析 以湖南益阳生物化工有限公司2000年为例,发酵水平为24 350 μg/mL (未染菌平均效价),由于染菌的原因,实际平均效价为20 680 μg/mL(见表5),一年中因发酵染菌而造成的损失超过300万元.因此,降低染菌率是关键. 2.3 蒸汽灭菌 通过2000年240发酵罐批的生产分析,总染菌率为15.4%.具体统计如表6. 3 讨论 3.1 培养基杂菌的多样性 用蒸汽灭菌时,压力不足,就达不到灭菌温度;蒸汽量不足,不能彻底杀灭杂菌;温度压力都够,灭菌时间不足,同样杀不灭培养基中的杂菌,通过多次试验得出结论如下图(温度-时间-灭菌效率).此外,灭菌时,培养基如产生大量泡沫或发酵罐内有污垢堆积,采用常规的灭菌条件往往不易得到良好的杀灭效果,设备制作安装不合理,灭菌时蒸汽走短路,也会使培养基灭菌不彻底.试验表明(图1,图中数字代表菌名见表1),最佳灭菌温度大于120 ℃,灭菌时间大于30 min. 3.2 井佐糖发酵过程中杂菌的增殖和发酵