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加拿大一枝黄花挥发油化学成分及其抗菌活性研究 加拿大的圣杯花是科。这是水稻科的一种。20世纪70年代，它被引入中国作为花卉，然后变成了杂草。现在，它通常分布在上海及其周边地区，在京沪、上海、浙江、江西铁路沿线浙江、宁波、台州等地，造成重大的生态危机。 加拿大一枝黄花作为一种庭院装饰植物,于18世纪首次从美洲东北部引入欧洲.在1850年左右从中欧开始传播,并且在1950年左右遍布欧洲.该植物在欧美已经有100多年的药用历史,用于治疗慢性肾炎、膀胱炎、尿结石、风湿、糖尿病等疾病,具有抗氧化、抗菌等药理作用. 加拿大一枝黄花与我国传统的药用植物一枝黄花(Solidago decurrensLour.)为同科同属植物,其药用功效也非常相近,挥发油成分被认为是其主要抗菌活性成分. 本文以采自上海江湾机场加拿大一枝黄花茎叶为原料,用水蒸气蒸馏法获得挥发油,采用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对其挥发油成分进行了分析鉴定,用色谱峰面积归一化法计算各组分的相对质量百分数.采用平板打孔法,使用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌以及枯草芽孢杆菌作为测试菌株,测试了加拿大一枝黄花挥发油的抗菌活性. 1. 实验仪器与试剂 (1) 材料 植物材料:加拿大一枝黄花(Solidago canadensisL.)地上部分,2004年9月采于上海江湾机场.供试菌种:金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),由复旦大学生命科学学院微生物系钟江教授提供. (2) 仪器 Finnigan Voyager气相色谱-质谱联用仪,美国Finnigan公司;DZF-6050型真空干燥箱,上海精宏实验设备有限公司;莱利达H2-9211K恒温振荡器,太仓市科教器材厂;GNP-9080型隔水式恒温培养箱,上海精宏实验设备有限公司;手提式压力蒸汽灭菌锅,上海华线医用仪器有限公司. (3) 试剂 酵母提取物(Yeast Extract) 、蛋白胨(Tryptone)、 琼脂粉(Agar Powder)、 氨苄西林(Ampicillin)×0.1 mg/mL、链霉素(Streptomycin)×0.1 mg/mL、四环素(Tetracycline)×0.1 mg/mL,Oxoid Ltd. England;NaCl购自上海文星生化科技有限公司. (4) LB培养基的配制 (1 000 mL) 酵母浸膏5 g;胰蛋白胨10 g;NaCl 10 g;琼脂20 g;pH 7.0~pH 7.5(用w(NaOH)=10%调至所需pH值). 2. 方法 (1) 质谱条件设置 采集新鲜加拿大一枝黄花地上部分,切碎,40 ℃干燥12 h.粉碎成粉末状,置于挥发油提取器中,提取4 h.提出的挥发油收集于磨口试管中,冰箱保存,供试.在Finnigan Voyager气相色谱-质谱联用仪上,采用DB-5石英毛细管柱(30 m×0.25 μm). 柱温60 ℃(保持2 min)至300 ℃(保持10 min),升温速度10 ℃/min.汽化温度250℃,He(载气)流量为1.0 mL/min,分流比100∶1,进样量1.0 μL.质谱条件:质谱检测器EI源,电子能量70 eV,检测室温度为200 ℃.各成分通过NIST标准质谱图库进行计算机检索. (2) 抗菌圈大小的测定 把灭菌后的固体LB培养基自然冷却至45 ℃,按照液体培养物与固体培养基体积比5%的比例,将金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌液体培养物分别加入固体LB培养基,混匀,倒平板.用已灭菌的打孔器在混菌平板每旋转60°打直径5 mm的孔,挖去琼脂,共打6个孔.分别在孔内注满挥发油1、挥发油2、浓度为0.1 mg/mL的氨苄西林、链霉素、四环素,剩下的一孔作为空白对照,做好标记.37 ℃培养18 h,观察并记录抗菌圈大小. 3. 结果与讨论 (1) 化合物结构鉴定 对加拿大一枝黄花挥发油挥发油用GC-MS方法进行分析,从中共鉴定出28种成分(见图1和表1),已鉴定化学成分的总含量约占全油的85.88%.其中单萜6个,质量百分数为挥发油总量的24.06%; 单萜含氧化合物3个,质量百分数为0.67%;倍半萜13个,质量百分数为56.45%;倍半萜含氧化合物3个,质量百分数为1.08%;二萜1个, 质量分数为0.15%;其他化合物共2个,质量百分数为3.37%.其主要成分为大香叶烯D(Germacrane D),D-柠檬烯(D-Limonene),α-蒎烯(α-Pinene)(见图1),质量百分数分别为48.08%,13.82%,6.25%.Danuta等从波兰产加拿大一枝黄花挥发油中鉴定了18个成分,主要成分是γ2-杜松烯(γ2-Cand