猕猴桃根正丁醇提取物对四氯化碳、d-半乳糖胺致小鼠血浆脂蛋白活性的影响.docxVIP

猕猴桃根正丁醇提取物对四氯化碳、d-半乳糖胺致小鼠血浆脂蛋白活性的影响 美丽的桃子（aciac.f.liancta.r.fenson）是蔷薇科植物。猕猴桃的根,又称藤藜根。具有清热利尿、活血消肿的功效。民间常用于治疗肝炎、水肿、跌打损伤、风湿关节痛、乳汁不足、淋虫、带下、疮疖、瘰疬。干品常用量30~60 g,配方水煎服。实验表明,猕猴桃果可预防癌症,果汁对小鼠肝损伤具有保护作用。根的乙醇粗提物,在体内外具有抗肿瘤作用。但美味猕猴桃根提取物保肝作用的研究尚未见报道。 本文从美味猕猴桃根中分离得到正丁醇提取物(BEAD),使用四氯化碳(CCl4)和D-半乳糖胺诱发小鼠急性肝细胞损伤,观察不同剂量BEAD对肝脏的保护作用,为研究美味猕猴桃根保肝作用提供实验数据和理论基础。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 实验动物动物 ICR种小白鼠雌雄各半,6~8 周龄,体重 18~22 g , 由无锡山禾药业实验动物中心提供,合格证号:SCXK(苏)2003-0004。分笼饲养,自由饮食,观察3 d后用于试验。 1.1.2 药物、试剂和仪器:聚合物-内酰胺-3-基 丙氨酸氨基转移酶(ALT 批号:010581) 测定试剂盒,天门冬氨酸氨基转移酶(AST 批号:020261)测定试剂盒:中生北控生物科技股份有限公司产品;四氯化碳(AR级):上海试剂公司产品,批号大豆色拉油(食品级):上海嘉里粮油工业有限公司产品,批号联苯双酯,北京协和药厂产品; D-半乳糖胺,Sigma公司产品;用生理盐水配制受试药,超声助溶或助悬。 5810R 冷冻高速离心机:德国EPPENDORF公司产品;BTS-370 plus全自动生化仪:西班牙BIOSYSTEMS公司产品;722型光栅分光光度计:上海分析仪器三厂制造。 1.1.3 深黄色流浸膏的提取 美味猕猴桃根9.8kg,切碎为片状,80℃以下烘干至水分小于质量分数10%,粉碎小于20目,用工业乙醇(体积分数65%)45 ℃以下回流提取3次,提取液于50 ℃减压浓缩,得360g深黄色流浸膏,然后取180 g膏状物,加入适量蒸馏水,搅成糊状混合液,依次用石油醚,乙酸乙酯,正丁醇提取3次(每次500 mL),分别合并提取液,减压回收溶剂得石油醚提取部分浸膏20 g,乙酸乙酯提取部分浸膏40 g和正丁醇提取部分的浸膏60 g。 1.2 大鼠血清中alt和ast活性的检测,见表1 1.2.1CCl4致小鼠急性肝损伤模型的建立 雄雌ICR种小鼠分笼饲养于20±2 ℃明暗各12 h的动物实验室内,自由饮水和进食。动物按体重随机分成6组,每组10只:正常对照组(NOR)、模型对照组(MOD)、联苯双酯阳性对照组(DGL 120 mg/kg)、BEAD低剂量组(E-L 30 mg/kg)、BEAD中剂量组(E-M 60 mg/kg)、BEAD高剂量组(E-H 120 mg/kg)。用药组每天按10 mL/kg体积灌胃给药(IG)1次,正常组和模型组给予等量生理盐水,连续7 d。于最后一次给药后10 h,正常组按0.1 mL/10 g腹腔注射大豆色拉油,其余组给予等量0.1% CCl4大豆色拉油溶液。同时禁食,自由饮水,动物禁食17 h后经眼眶取血,常规制备血浆后测定血清ALT、AST,并取肝按常规作组织病理学检查。 1.2.2D-半乳糖胺致小鼠急性肝损伤模型的建立 该模型的建立方法同1.2.1,只是致肝损伤的试剂由D-半乳糖胺(600 mg/kg)代替了四氯化碳(0.1%),其它处理方法相同。 1.2.3检测指标 釆用速率法以全自动生化分析仪测定血清中ALT及AST活性,检测法参照说明进行。 1.2.4数据处理 釆用SPSS10.O统计软件进行分析。实验数据以xˉ±sxˉ±s表示,多组间两两比较方差分析进行统计学处理。 2 结果与讨论 2.1 小鼠胃压图1 模型组、提取物组可见实质器官不同程度的变化,肝脏肿大,颜色灰黄或见到表面有针尖到米粒大小的点状病灶,有的似煮熟样,质地软脆;胆囊扩大,充满胆汁;肾脏肿大,质地柔软,颜色灰黄或灰白;心脏灰白,质地软;脾脏肿大,色变暗质软;在腹腔、心包腔可见少量积液。两组小鼠均见胃臌气涨,部分小鼠胃浆膜可见点状出血,腹腔渗出液稍增多。对照组小鼠未见异常。 2.2 血清中的dea和ast 2.2.1 对ccl4肝损伤小鼠血清alt和ast值的影响 BEAD对CCl4诱导的小鼠肝损伤血清ALT、AST的影响见表1。 表1结果表明:与正常对照组相比,模型组CCl4肝损伤小鼠血清ALT和AST值明显升高(P0.01)。与阳性对照组(联苯双酯组+ CCL4)相似,正丁醇提取物各剂量组均程度不同地使CCl4肝损伤小鼠升高的血清ALT和AST不同程度的降低,中