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侧脑室注射-氨基丁酸对束旁核痛-神经元电活动的影响 氨基丙烯酸（gaba）是一种广泛存在于腓肠神经系统的重要受体。它主要通过特定的受体激活，并参与身体的各种生理功能的调节。近年研究发现, GABA和内源性阿片肽是脊髓内重要的抑制性递质, 也是痛觉调制的抑制性递质之一, 可抑制伤害性刺激信号在中枢的传递。形态学和生理学资料表明, 丘脑束旁核 (PF) 在中枢痛信息的传递和整合过程中具有重要作用。但是, 关于荷包牡丹碱对抗GABA对PF中痛兴奋神经元 (PEN) 电活动的作用尚未见报道。因此, 本实验以伤害性刺激引起PF中PEN的电活动为指标, 研究了GABA及其GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱 (Bic) 对PEN诱发放电活动的影响, 以探讨GABA及其GABAA受体在痛觉调制中的作用。 材料和方法 1. 实验动物 实验用64只体重在220～280g的健康Wistar大鼠, 由哈尔滨医科大学附属第二医院动物实验中心提供。 2. gaba注文 实验分为4组: (1) 生理盐水组 (n=7) :用自动抽注仪 (ZCZ-50, 浙江医科大学医学仪器实验厂) icv匀速注入生理盐水10 μl, 2 min注完; (2) GABA组 (n=30) :icv匀速注入GABA (50 μg/μl, Sigma) 10 μl, 其余操作同 (1) ; (3) GABA+生理盐水组 (n=7) :icv匀速注入GABA 10 μl后2 min, icv再注入生理盐水10 μl, 2 min注完; (4) GABA+Bic组 (n=20) :用Bic (1 μg/μl, Sigma) 代替生理盐水, 其余操作同 (3) 。 3. pelegrano分析 在20%氨基甲酸乙酯 (5 ml/kg体重) 腹腔注射麻醉下作气管插管、颅骨开窗和分离坐骨神经。术后大鼠头部固定在脑立体定位仪 (SN-2, Narishige) 上, 按Pellegrino图谱B坐标系对PF定位, PF (A:-2.2～2.6 mm;L/R:1.0～1.4 mm;H:5.5～6.5 mm) , 将外径为0.8 mm的不锈钢套管插入右侧脑室 (A:-0.2 mm;R:1.5 mm;H:3.0 mm) 供注射GABA用。 4. 作用原理及测量过程 将内充3 mol/L氯化钾溶液、直流电阻为10～30 MΩ的玻璃微电极固定于SM-21微电极操纵器 (Narishige) 上, 插入左侧PF内, 由微电极引导出的神经元放电, 经前级放大器 (JSD-731-F, 广东师院无线电厂) 放大, 显示于示波器 (VC-9, Nihon Kohden) 上。用电子刺激器 (SEN-3301) 发出的串脉冲 (刺激参数:强度5 mA, 波宽0.3 ms, 间隔5 ms, 串脉冲5个) 刺激坐骨神经作为伤害性刺激, 以移动关节和触毛作为非伤害性刺激, 鉴别痛反应神经元。然后, 由双道磁带录音机 (ST-CH707X, Panasonic) 记录PEN的电变化, 连续观察30 min。实验结束后, 将充灌有2%滂胺天蓝溶液的记录微电极通以阴极直流电 (25 μA, 10 min) , 标记微电极尖端位置。 5. 统计学处理 实验结果经Powerlab/8s数据处理器处理后输入计算机, 用Chart 5.3.0软件进行数据分析。实验数据以均值±标准误表示, 统计学处理采用配对双尾t检验。P0.05表示差异有显著性。 结果 1. pan诱发放电高链电泳 在GABA组30只大鼠PF中完整记录了28个PEN放电。如图1所示, icv注射GABA后PEN诱发放电频率减少, 潜伏期延长。在生理盐水组, 7只大鼠完整记录了12个PEN放电, 注射生理盐水前、后, PEN诱发放电活动无显著差异 (见图1) 。 对28个PEN的记录进行统计学处理, 注射GABA后即刻, PEN诱发放电的净增值 (电刺激坐骨神经后PEN痛诱发放电平均频率与刺激前2 s内自发放电平均频率之差) 开始减少, 在注药后2 min时最为明显, 由注药前的11.19±1.29 Hz减少至3.25±0.68 Hz。注药后即刻至2 min, PEN诱发放电频率的净增值与注药前及生理盐水组同期相比具有非常显著性差异 (P0.01, 见图2) 。注药后4 min, 净增值开始逐渐恢复, 升高至6.85±0.98 Hz, 此后逐渐恢复至接近注药前水平。 28个PEN注射GABA后即刻, PEN诱发放电潜伏期开始延长, 由注药前的0.18±0.01 s延长至0.46±0.03 s。注药后2 min最明显, PEN诱发放电的潜伏期延长至0.54±0.03 s。注药后即刻至4 min, PEN的潜伏期与注药前及生理盐水组同期相比具有非常显著性差异 (P0.01,