手针与电针足三里镇痛效应的穴位传入机制比较.docxVIP

手针与电针足三里镇痛效应的穴位传入机制比较 自20世纪60年代以来，针灸和镇痛的有效临床应用得到了充分证明。对针刺镇痛的外周机制和中枢机制研究较多,但目前尚未达成统一的认识,多数学者认为针刺镇痛是由穴位刺激点通过不同的传入机制作用于中枢,经整合修饰重组处理之后再反馈到脏腑器官,对其活动进行调节和控制,从而起到镇痛作用。 近年来,借助解剖学和临床磁共振成像及X射线计算机断层扫描等手段对穴位组织的形态研究表明,穴位与结缔组织存在密切的联系。有人认为:人体经络穴位是以结缔组织为基础的复杂体系,其中除了丰富的神经感受器以外,还包含具有传输信息和能量功能的胶原纤维,及调节机体免疫功能的肥大细胞等物质。在此假设基础上的研究结果表明:针刺镇痛机制可能是因为手法的运用引起了针体周围的组织牵拉,从而激发细胞水平的信号循经传导,最终形成特异性疗效。本文假设胶原纤维、神经及肥大细胞与针刺镇痛信号的启动机制相关,并试图通过破坏或屏蔽手针、电针过程中的胶原纤维的结构或肥大细胞功能,借助大鼠足部痛阈及穴位处肥大细胞脱颗粒率两项检测指标的差异性来分析这两种针刺镇痛方法的传入机制。 1 材料和方法 1.1 实验动物 SD成年雄性大鼠共64只,体重(200±20) g,由中国科学院上海实验动物中心提供。在实验开始前进行痛阈筛选。 1.2 聚合酶原酶as-ct 完全弗氏佐剂(complete Freunds’adjuvant,CFA),Ⅰ型胶原酶,色甘酸钠,均购自Sigma公司。IITC 336 GT爪/尾痛觉测试仪,购自IITC公司。LH 202 H型韩氏穴位神经测试仪,北京华威有限公司生产。 1.3 患侧“足三里”注射 造模前1周开始进行动物环境适应。将大鼠随机分为8组,每组8只。正常组:不造模。模型组:实验第1天在大鼠左侧踝关节腔内注射CFA 0.05 ml,制成佐剂性关节炎(AA)模型。其余各组造模方法同模型组。手针组:本实验中的手针均使用捻转手法,直径 0.25 mm 毫针直刺左后肢“足三里”穴,深度约为 7 mm,捻转频率保持在2～3次/s,每隔 30 s 进行1次捻转操作,每次持续 30 s,如此交替执行持续 20 min。电针组:直刺左后肢“足三里” 7 mm、“昆仑” 2 mm,电针参数为:2～100 Hz 疏密波, 强度为0.5、1.0、1.5 mA,每个强度各 7 min。胶原酶手针组及胶原酶电针组:分别于针刺前 30 min 在患侧“足三里”注射Ⅰ型胶原酶 20 μl (5 mg/ml),其余操作分别同手针组及电针组。色甘酸钠手针组及色甘酸钠电针组:分别于针刺前 30 min 在患侧“足三里”注射色甘酸钠 20 μl(0.02 g/ml),其余操作同手针组及电针组。 所有实验方法均经上海市针灸经络研究中心实验动物伦理委员会通过。 1.4 组织切片观察 大鼠痛阈测定:采用热刺激法,以缩爪潜伏期作为痛阈指标。安静环境中,室温(23±1) ℃,将大鼠放入辐射热测痛仪的玻璃格子中,全身可以自由活动。待大鼠静置 20 min 后,用强光照射大鼠左踝关节(上限为 20 s),直至大鼠缩爪,停止照射,记录大鼠的缩爪潜伏期。每隔 10 min 测定1次,共测2次,取平均值。正常组与模型组于实验第4天测痛1次,其余各组于实验第4天处理前、后各测痛1次。 穴区局部肥大细胞脱颗粒率:患侧“足三里”穴区组织切片采用甲苯胺蓝染色,常规脱水、透明后封片。在10×40倍光镜下对皮肤中肥大细胞进行计数。脱颗粒计数标准:肥大细胞壁破裂且有颗粒散落在基质中记为1。脱颗粒率=脱颗粒肥大细胞数/肥大细胞总数×100%。每只动物组织块选取靠近针刺部位的4张切片进行肥大细胞脱颗粒率平均值计算。 1.5 不同处理前后痛阈、肥大细胞脱颗粒率的变化 比较大鼠的痛阈、痛阈变化率[(实验第4天处理后痛阈-实验第4天处理前痛阈)/实验第4天处理前痛阈×100%]、肥大细胞脱颗粒率的变化。用SPSS 10.0软件进行统计分析,数据以均数±标准差(xˉ±s)(xˉ±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,继以SNK检验,组内比较用配对t检验,以P0.05作为差异有统计学意义的标准。 2 结果 2.1 大鼠的痛阈变化 大鼠左踝关节注射CFA后 8 h,足踝部开始出现红肿疼痛, 18 h 达到高峰,疼痛效应可持续6周左右。其间,大鼠活动明显减少,并出现跛行或蜷缩左肢不着地。各组实验第4天处理前痛阈显示(表1):除正常组以外,各组间痛阈差异无统计学意义(P0.05);与正常组比较,各组痛阈明显降低(P0.05)。从肥大细胞脱颗粒率来看,正常组和模型组肥大细胞脱颗粒率较低,在10%左右,见表1、图1a、图1b。 2.2 手针和电针刺激对大鼠痛阈的影响 由表1可知,手针组和电针组第4天处理后痛阈较同组处理