手针刺激对大鼠足三里穴区神经束的影响.docxVIP

手针刺激对大鼠足三里穴区神经束的影响 根据大量临床研究和动物实验，针灸不仅可以起到镇痛的作用，还可以调节身体和肠道疾病的生理功能来治疗。在针刺过程中,神经起着不可或缺的作用,其中外周神经是针刺即刻有效信号的重要传入途径之一,阻滞针刺穴位神经对针刺的镇痛效应有明显的抑制作用。此外,我们以往的实验发现,肥大细胞也参与了针刺镇痛的过程,如针刺后穴位处肥大细胞脱颗粒率明显升高,而通过色甘酸钠屏蔽肥大细胞脱颗粒后,针刺镇痛的作用被削弱。 本研究观察手针刺激大鼠“足三里”穴位后诱发该神经束放电的变化,分析针刺引起的穴位处外周神经放电的即刻效应;同时观察运用细胞膜稳定剂色甘酸钠或Ⅰ型胶原酶后,肥大细胞脱颗粒状况的改变,以及对手针诱发的外周神经电信号变化的影响,从而进一步探讨针刺效应的外周机制。 1 材料和方法 1.1 美国scxk思想研究传播 成年雄性Sprague-Dawley大鼠30只,清洁级,体质量(200±20)g,由上海市西普尔-必凯实验动物有限公司提供,许可证号:SCXK(沪)2008-0016。将大鼠随机分为5组:空白组、对照组、手针足三里组(简称手针组)、手针+色甘酸钠组、手针+胶原酶组,每组6只。所有动物实验方法经过上海市针灸经络研究中心实验动物伦理委员会讨论通过。 1.2 足三里穴区被毛 空白组:不对动物进行任何处理。 手针组:参照《实验针灸学》中常用实验动物针灸穴位附图定位,即“足三里”穴位于膝关节后外侧,腓骨小头下约5mm处。剪去“足三里”穴区的被毛,选择0.35mm×25mm毫针直刺入大鼠左侧“足三里”穴,深度7mm左右,按照1次/s的频率进行提插刺激,提插1min,留针1min,如此反复交替,持续20min。 对照组:将毫针直刺入大鼠左侧“足三里”穴,不进行任何刺激,留针20min。 手针+色甘酸钠组:在左侧“足三里”穴位注射20μL色甘酸钠(0.02mg/mL),10min后进行手针刺激。 手针+胶原酶组:在左侧“足三里”穴位注射20μLⅠ型胶原酶(5μg/mL),30min后进行手针刺激。 1.3 肌肉组织固定 大鼠用10%水合氯醛(400mg/kg)腹腔注射麻醉,自主呼吸,体温用加热装置(日本光电,Animal blanket controller ATB-1100)维持在37.5℃左右。当大鼠处于完全麻醉状态后取俯卧位固定,左后肢股骨内侧0.5cm平行股骨方向切开皮肤约3cm,钝性分离肌肉组织,在股部沿股二头肌和半膜肌之间的间隙找出坐骨神经。用玻璃解剖针轻挑暴露坐骨神经,并以温热石蜡油保护以备电极记录。 1.4 实验大鼠压力检测 外周神经电信号:将上述分离的神经干置于一双金属电极上,神经冲动信号经电极引入前置放大器(日本DAGAN,EX 4-400,高通和低通滤波设置为10Hz和1 000Hz),并输入多通道生理记录系统(澳大利亚AD Instruments,Power Lab 16/30)。电生理记录时采用铜网屏蔽罩以防外界环境干扰。用Chart软件(澳大利亚AD Instruments,Version5.3,采样频率20k/s)对神经束放电进行采样,记录手针刺激前30min、手针20min以及停针后30min的电信号。坐骨神经信号经过20Hz数字滤波处理,进行快速傅里叶变换分析。在每分钟采集的神经信号序列中随机抽取6段,每段为6s,包含120 000个数据点,并让它们依次通过Hamming窗口平滑数据,然后利用Chart软件中的spectrum模块计算出它们的平均序列。各组选取的信号分别为:(1)空白组,信号记录稳定15min后,随机1min的信号;(2)对照组,进针后,信号记录稳定5min后,随机1min的信号;(3)手针组、手针+色甘酸钠组、手针+胶原酶组,进针提插刺激信号记录5min后,随机1min提插刺激的即刻信号。 穴区局部肥大细胞脱颗粒率:实验完毕后,各组大鼠经颈椎脱臼处死,取以穴区为中心体积约为5mm×5mm×5mm的标本(包含皮肤及皮下结缔组织),经10%福尔马林固定液固定48h后将组织脱水、石蜡包埋,制作连续切片(厚约4μm),切片方向为皮肤纵切面。组织切片采用0.5%甲苯胺蓝染色,常规脱水、透明后封片。在10×40倍光镜下对组织中肥大细胞进行计数。脱颗粒率=脱颗粒肥大细胞数/肥大细胞总数×100%。每只动物计数3张切片,取平均值。 1.5 统计学方法 本实验数据用均数±标准误表示,通过SPSS 12.0软件进行统计分析,多组间比较采用方差分析,继以LSD检验或Dunnett’s(方差不齐)检验,以P0.05作为差异具有统计学意义的标准。 2 结果 2.1 坐骨神经活动功率谱 在同一穴位处,不同的处理因素下,通过手针刺激大鼠“足三里”穴,均可诱发坐骨神经束放电冲动(图1)。经过快速