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两种提取方法提取的马铃薯籽油的脂肪酸组成分析 兰花（l.）是科木兰科的一种植物。为多年生直立草本,高30~70cm。分布于全国各省区;亚洲南部及东部广布。并富含多种维生素,在民间作蔬菜食用。全草入药,能消食积除湿热、利小便、退咳、解毒,治外感风热、肝炎、消化不良、中耳炎等。马兰,味辛,性凉,入阳明血分、肺、肝经;功能凉血,清热,利湿,解毒;主治吐血、血痢、创伤出血、疟疾、黄疸、水肿、淋浊,咽痛、喉痹、痔疮、痈肿、丹毒、蛇咬伤。《日华子本草》:“根,叶,破宿血,养新血,止吐血,合金疮,断血痢,解酒疸及诸菌毒;生捣,敷蛇咬。”《医林纂要》:“补肾命,除寒湿,暖子宫,杀虫。治小儿疳积。”对马兰籽中脂肪酸的提取分析研究在国内报道罕见,对其脂肪酸成分进行分析,可为其开发利用提供科学依据。本实验采用索氏提取法对马兰籽油进行提取,分别采用两种方法进行甲酯化处理,用GC-M S进行分析,分别鉴定出其中的脂肪酸,并对其主要成分进行对比。 1 材料和方法 1.1 材料和试剂 将马兰籽粉碎,过筛,取粒度大于1mm的马兰籽,6 0℃烘干6 h,备用。 无水乙醚、硫酸、氢氧化钠、无水硫酸钠均为分析纯。 1.2 设备和设备 HP6890GC/5973MS型气相色谱-质谱联用仪美国惠普公司;R2201型旋转蒸发器上海中科机械研究所。 1.3 方法 1.3.1 索氏抽提液的制备 称马兰籽(粒度大于1mm)20.0554g,装入滤纸筒,放入索氏提取器中,取提取剂无水乙醚150ml注入500ml烧瓶中,用略高于提取剂沸点的温度,恒温水浴抽提6 h,直至管内无色为止。其出油率为8.70%。 1.3.2 兰籽油的活性 甲酯化方法1:取0.5ml马兰籽油,2ml正己烷,1ml 0.5mol/L KOH-CH3OH溶液,70℃水浴10min,冷却移至有刻度试管内,加入10ml蒸馏水,超声、离心,取上层清液,待测。 甲酯化方法2:取2.00g马兰籽油于500ml烧杯中,称5.00g氢氧化钠加50ml无水乙醇中,待其溶解后加至有样品的烧杯中。烧杯置于75~80℃的水浴中皂化1h。按1:1体积比加入硫酸进行酸化。上层脂肪酸用蒸馏水洗至中性。取0.10g脂肪酸于10ml容量瓶中,加2~3ml无水甲醇于水浴上加热溶解。滴加浓硫酸3~5滴,充分摇匀。放置15min后加入1~3ml蒸馏水和1ml乙醚,剧烈振摇2 m i n,静置分层,取醚相,待测。 1.3.3 仪器和质谱条件 色谱条件:色谱柱为HP-5(25m×0.20mm,0.33μm)弹性石英毛细管柱;进样口温度:300℃;程序升温:100℃升至280℃,升温速率:10℃/min,保持10min;分流比:100:1;进样量:0.4μl;载气流量:1ml/min;溶剂延迟:3m in。 质谱条件:离子源:电子轰击源;离子源温度:230℃;电离电压:70e V;电子倍增器电压:198 8V;发射电流:34.6μA;接口温度:230℃;质量范围:m/z 20~500。 1.3.4 分析方法的建立 利用GC-MS分析,通过化学工作站G1701BA的数据处理系统,利用Nist98标准质谱库检索鉴定成分,按面积归一化法进行定量分析,测得其相对百分含量。 2 脂肪酸组成及相对百分含量 由化学工作站给出马兰籽油脂肪酸甲酯的总离子流图分别为图1A(甲酯化方法1)和图1B(甲酯化方法2)。两种酯化方法的经GC-MS检测,马兰籽油中的脂肪酸及其在油中相对百分含量列于表1。 由表1可知,采用甲酯化方法1可鉴定出16种脂肪酸,占马兰籽油总量的98.66%,其中十八碳二烯酸占马兰籽油总量的64.45%,十八碳烯酸占马兰籽油的17.96%,十六酸占马兰籽油总量的8.28%。采用甲酯化方法2可鉴定出6种脂肪酸,占马兰籽油总量的63.93%,其中十八碳二烯酸占马兰籽油总量的20.29%,十八碳烯酸占马兰籽油的24.14%,十六酸占马兰籽油总量的13.03%。所检出的脂肪酸的可信度均在90%以上。 3 脂肪酸的纯化 马兰种子的出油率为8.70%。 甲酯化方法1鉴定出的脂肪酸成分多于方法2,采用甲酯化方法1可检测出16种脂肪酸其中十八碳二烯酸占绝对多数,采用甲酯化方法2可检测出6种脂肪酸。 采用两种不同的甲酯化方法,其检出脂肪酸的种类及其占马兰籽油总量的比例均有差异,原因是甲酯化方法2步骤较多,使其脂肪酸在甲酯化过程中发生变性,被转化为其他非酸类物质;另外,有些脂肪酸在纯化过程中损失掉。 在马兰籽油中,甲酯化方法1鉴定出的脂肪酸,其中十六酸占马兰籽中脂肪油总量的8.28%,十六酸俗名棕榈酸,属于饱和脂肪酸,适量食用有利于脂肪代谢,过量食用会使体内脂肪沉积,也是引起诱发高血脂和血管硬化的一个主要原因。十八碳烯酸占马兰籽中脂肪油总量的17.96%,十八碳烯酸俗名油酸,