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中国人尼曼-匹克病家系遗传基础及smpd1基因检测的意义 尼曼-匹克病（npd）是一种正常的染色体隐性遗传因素。根据临床表现可分为5型:A型 (急性神经型或婴儿型) 、B型 (慢性非神经型或内脏型) 、C型 (慢性神经型或幼年型) 、D型 (No Va-Scotia型) 、E型 (成人非神经型) 。据报道A型约占所有NPD的85%。A型与B型NPD均为编码ASM (acid sphingomyelinase) 蛋白的SMPD1 (sphingomyelin phosphodiesterase 1) 基因发生突变所致。到目前为止, 已发现的SMPD1基因突变有100余种, 包括单个碱基替换、小的缺失和插入、剪切位点的改变等。目前国内关于本病的报道多是关于临床指征和实验室诊断, 而有关基因突变检测的研究很少。本研究报道3例中国人NPD家系发病的分子遗传学及SMPD1基因检测结果。 1 家系及pcr检测 3例NPD患儿均来源于我院儿科病房, 相互间无关联, 其家系分别命名为家系1、家系2和家系3。 家系1先证者, 女, 9个月, 汉族。以发热13 d、皮疹7 d、皮肤黄染半天伴精神差收入院。G2P2。父母非近亲结婚。体格检查:全身可见红色针尖样皮疹, 高出皮面, 压之褪色, 有棘手感。全身皮肤轻度黄染, 巩膜无黄染。肝脏平脐、质硬、光滑无包块, 脾脏肋下未触及。神经系统检查无阳性体征。骨髓细胞学检查:全片易见尼曼匹克细胞 (细胞胞体较大, 核较小, 胞浆量丰富, 浆内充满桑葚样脂肪空泡, 部分细胞吞噬红细胞及血小板) 。胸部CT示双侧胸腔积液, 右侧为著并右肺膨隆不全, 双肺炎症。腹部彩色超声示肝、脾肿大。家系中仅先证者受累, 其父母均体健, 家族中无类似病史。 家系2先证者, 女, 4个月, 汉族。以黑便22 d伴发热、偶咳、精神差就诊。G3P3。父母非近亲结婚。体格检查:全身皮肤黏膜无黄染、无皮疹及出血点。肝脏肿大平脐、质中等、光滑无包块, 脾脏肋下3 cm、质软。神经系统检查无阳性体征。骨髓细胞学检查:可见尼曼匹克细胞。胸部X片未见明显异常。腹部彩色超声示肝、脾肿大。其姐6岁, 兄2岁4个月, 家系中仅先证者受累, 其父母均体健, 家族中无类似病史。 家系3先证者, 男, 11个月, 汉族。因肝脏肿大4 d伴发热、腹泻、全身皮疹就诊。G2P2。足月剖宫产, 出生时一般情况可。父母非近亲结婚。体格检查:全身皮肤黏膜无黄染, 全身可见散在红色皮疹, 部分高出皮面。腹软, 肝脏肿大平脐、质中、光滑无包块, 脾脏肋下2 cm、质软、光滑无包块。神经系统检查无阳性体征。骨髓细胞学检查:全片易见尼曼匹克细胞。肺部CT示双肺下叶斑片状模糊影。腹部彩色超声示肝、脾肿大。家系中仅先证者受累, 其父母均体健, 家族中无类似病史。 经知情同意后, 分别采集3个家系的先证者及其父母、兄弟姐妹及20例正常对照组 (收集自我院门诊健康体检儿童, 经遗传咨询证实无遗传病家族史) 的外周血样, 置于乙二胺四乙酸二钠 (EDTA) 管中保存。采用1 ml血液基因组DNA提取试剂盒 (上海莱枫生物科技有限公司) 进行DNA提取。从Gen Bank database (登录号为NG_011780.1) 中获取SMPD1基因的全序列, 根据引物设计原则, 进行引物设计, 共设计5对引物 (表1) 。引物由上海生工生物技术有限公司合成。PCR扩增反应总体系为50μl, 包含25μl Dream Taq TM Green PCR Master Mix (2×) (Dream Taq TM DNA Green buffer, d NTPs, 4 mmol Mg Cl2) , 上下游引物各2μl (10μmol/L) , DNA模板100 ng, 无核酸去离子水补足体积。PCR反应条件:95℃预变性3 min, 继之95℃变性30 s, 退火 (外显子1、2的前半部分、2的后半部分、3~5、6的扩增退火温度依次为:64℃、60℃、62℃、59℃、59℃) 30 s, 72℃延伸1 min/kb共35个循环, 后接72℃终延伸5 min。采用PCR产物回收试剂盒进行产物回收, 用QIAGEN QIA quick Gel Extraction Kit纯化DNA片段。将纯化后的PCR产物委托上海生工生物工程有限公司采用ABI-PRISMTM3730XL DNA Sequencer测序仪、Big Dye terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit试剂盒进行正反向测序。将测序结果与Gen Bank中的原始序列应用DNAMAN 6.0.40软件进行对比分析, 根据已公布的对人类基因突变的标准命名原则 (Antonarakis 1998) 记录下经比对分析