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体外养分消化模拟装置的建立及相关参数研究 0 肉仔鸡体外消化模拟技术 [研究意义]使用外部消化模拟技术来评估饲料的营养价值越来越受到重视。外部消化模拟技术具有简单、快速、再现性好等特点。建立一系列肉鸡外部消化模拟技术对快速、准确评估肉鸡饲料的营养价值非常重要。【前人研究进展】近年来，有关猪体外消化模拟技术的研究报道较多，但有关肉仔鸡体外模拟方法的报道相对较少。如何确定消化酶水平、pH和食糜停留时间等消化参数是体外消化模拟技术的关键。以往一些体外消化模拟方法通常是以体外养分消化率最大时的消化参数为最适参数，Bedford等则根据食糜粘性变化来确定肉仔鸡体外消化参数，这些方法所确定消化参数与畜禽消化道内实际情况存在多大差异尚无从知晓。肉仔鸡生长速度快，各消化参数随日龄的变化较大，以体外养分消化率最大为基准来确定肉仔鸡体外消化参数，不足以准确反映出肉仔鸡消化道内环境的真实情况。如何准确地确立不同日龄阶段肉仔鸡消化参数，并在体外条件下对其消化道内环境和养分的吸收进行科学模拟是建立肉仔鸡体外消化模拟技术的关键。【本研究切入点】本研究将根据张铁鹰等的肉仔鸡消化参数发育规律的研究结果，确定各日龄肉仔鸡消化参数，采用体外连续透析装置对肉仔鸡消化吸收情况进行模拟。【拟解决的关键问题】通过研究透析液流速、透析袋截留分子量及适宜的样品粒度和重量等参数对体外养分消化率的影响，确定该装置相应的适宜参数，最终确立一套可模拟任一日龄肉仔鸡对日粮养分消化吸收的体外操作方法，并检验其稳定性与可靠性。 1 材料和方法 1.1 透析袋透析袋 恒温振荡水浴锅，8通道兰格蠕动泵（BT00-600M，保定兰格公司），胃和小肠消化室，量筒和容量瓶（500 ml），透析袋（100 mm×20 mm，?20 mm，截留分子量分别为1 200～2 000 D、12 000～14 000D，华美公司进口分装）。胃蛋白酶（P-7 000,Sigma）、胰酶（P-7545,Sigma）、胰蛋白酶（T-7409,Sigma）、淀粉酶（A-3176,Sigma）和脂肪酶（L-3126,Sigma）等几种消化酶。 1.2 试验日粮 选用0～21日龄肉仔鸡玉米-豆粕日粮的组成与营养水平见表1。 1.3 试验方法和测量指标 1.3.1 日龄与空肠内胆汁酸水平间的函数关系式分析 分别确立肉仔鸡嗉囊、肌胃和腺胃和小肠内食糜含水量、pH、消化酶水平、食糜停留时间和胆汁酸水平等参数随日龄的变化规律与体外消化模拟操作步骤。日粮养分在肉仔鸡小肠内的消化与吸收主要发生在空肠段，为简化体外消化模拟技术的操作程序，各日龄小肠段消化参数均以空肠为主。根据肉仔鸡体消化道食糜p H、消化酶水平和含水量等参数与日龄间的函数关系，计算出任一日龄肉仔鸡消化道的相应消化参数，使体外各项消化参数更接近于体内实际情况。胆汁酸有助于脂肪的消化与吸收，当消化道内胆汁酸含量低于2mmol·L-1时将对脂肪的消化和吸收产生不利影响。根据Green等对肉仔鸡空肠内胆汁酸水平的测定结果，建立日龄与空肠内胆汁酸水平间的函数关系式（表2），计算出任一日龄肉仔鸡空肠食糜中胆汁酸水平，用来确定各日龄肉仔鸡体外消化胆汁酸的水平。 根据Shires等确立的食糜在肉仔鸡各段消化道内停留时间与体重间的关系，建立日龄与食糜在各段消化道内停留时间的函数关系（表3），根据多项式可计算出任一日龄肉仔鸡食糜在各段消化道内的停留时间，确定食糜在肉仔鸡各段体外消化模拟装置中的停留时间。 1.3.2 鸡囊、胃和小鼠食糜消化酶指标的测定 根据肉仔鸡各项消化参数与日龄间的关系，计算出14日龄肉仔鸡嗉囊、胃和小肠食糜p H、水分含量、消化酶水平以及食糜停留时间与胆汁酸水平等参数（表4和表5），并根据肉仔鸡各项消化参数配置各日龄阶段肉仔鸡胃与小肠的消化液与消化酶。 1.3.3 肉鸡室外消化模拟装置的设计、组成和参数的确定 1.3.3. 体外消化模拟 肉仔鸡体外消化模拟装置是在体外条件下，借助自制仪器与设备分别模拟肉仔鸡的嗉囊、胃（肌胃和腺胃）和小肠3个消化道部位，并对饲料养分的消化与吸收等主要生理过程进行模拟。本研究建立的肉仔鸡体外消化模拟装置分别包括恒温装置、消化装置和吸收装置。其中，嗉囊、胃和小肠消化室的组成见图1和图2ㄢ 1.3.3. 消化期的消化 嗉囊消化期：准确称取1.0000 g过60目筛的日粮样品，放入嗉囊消化室内。加入1.6 ml 0.12 mol·L-1盐酸溶液，将食糜pH调至4.36，用3号橡胶塞封口。将食糜混合均匀后，放入41℃的恒温水浴锅内振荡（120次/min）。预热5 min后开始计时，继续消化6 min。胃消化期：取出嗉囊消化室，小心取下橡胶塞。向消化室内加入0.5 ml 0.9 mol·L-1的胃蛋白酶盐酸溶液，将食糜p H调至2.66，封口。将