罗格列酮联合二甲双胍对大鼠非酒精性脂肪肝的防治作用.docxVIP

罗格列酮联合二甲双胍对大鼠非酒精性脂肪肝的防治作用 肥胖病的发病率正在增加。50%以上的肥胖者存在非酒精性肝疾病（nafd），可继续发展肝脏钙化和肝硬化。胰岛素抵抗是NAFLD主要致病因素, 噻唑烷二酮类降糖药物罗格列酮和双胍类降糖药二甲双胍有改善胰岛素抵抗作用, 研究表明这两种药物对脂肪肝有一定治疗作用。本文研究这两种药物合用对大鼠NAFLD的治疗作用。 材料和方法 一、 罗格列酮、二甲双醚和双fig 胆固醇购自上海化学试剂公司, 猪油由市场生猪油炼制, 罗格列酮由葛兰史克有限公司馈赠, 商品名文迪亚 (批 , 二甲双胍由中美上海施贵宝制药有限公司馈赠, 商品名格华止 (批号4974) 。 二、 方法 1. 小组与b组的饲养管理 42只SD大鼠购自中国科学院上海实验动物中心, 雄性, 平均体重 (139.23±8.14) g。随机分为3组, 各组间体重比较差异无统计学意义。C组以普通饲料喂养;B组予高脂饲料 (普通饲料中加2%胆固醇和10%猪油配成) , A组在B组基础上每日以罗格列酮和二甲双胍灌胃, 罗格列酮1 mg·kg-1·d-1, 每日1次, 二甲双胍250 mg·kg-1·d-1, 每日2次, C组和B组用等量生理盐水灌胃。三组大鼠分笼饲养, 自由进水和进食, 于实验12周后隔夜禁食, 次日以氯氨酮 (药盒批号010901) 50 mg/kg腹腔内麻醉后, 股动脉采血处死。 2. 肝脂肪变性程度检测 处死前称量动物体重和肝脏湿重。全自动生化分析仪检测血糖 (Glu) 、血浆甘油三酯 (TG) 、胆固醇 (CH) 、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) , 丙氨酸氨基转移酶 (ALT) , 门冬氨酸氨基转移酶 (AST) 。常规制备肝组织匀浆和肝组织石蜡切片标本, 石蜡切片标本HE染色, 光镜下拍摄放大400倍照片。并参照文献判断肝脂肪变性程度:正常为未见脂变细胞;轻度为含脂滴细胞数/总细胞数比值1/3;中度为含脂滴细胞数/总细胞数比值在1/3～2/3;重度为含脂滴细胞数/总细胞数比值2/3;极重度为含脂滴细胞数/总细胞数比值≈1。肝组织脂质测定时取1克肝细胞匀浆, 用氯仿:甲醇 (2∶1V/V) 液抽提脂质, 即上清可溶部分, 用酶法测定TG。 三、 统计学方法 采用SPSS 11.0 统计软件分析, 计量数据以均值±标准差(xˉ±s)(xˉ±s)表示, 采用单因素方差分析法, 计数资料用等级分组资料秩和检验方法,P0.05 为差异有统计学意义。 组血糖、血脂和alt、ast比较 各组大鼠初始体重比较差异无统计学意义, 各组动物无死亡。与C组比较, B组体重增加 (P0.01) , 而A组体重无明显变化;与C组比较, B组、A组肝湿重、肝指数 (肝湿重/体重×100%) 增加 (P0.01) ;与B组比较, A组肝湿重、肝指数均下降 (P0.01) (表1) 。 与C组比较, B组血糖升高 (P0.05) , A组血糖与B、C组比较差异无统计学意义。3组间ALT、AST比较差异无统计学意义 (表2) 。 B组TG和CH高于C组 (P0.01) ;B组HDL-C低于C组 (P0.01) , A组HDL-C低于C组 (P0.05) , 但高于B组 (P0.01) ;B组肝脏TG高于C组 (P0.01) , A组肝脏TG高于C组 (P0.05) , 但低于B组 (P0.01) (表3) 。 C组大鼠无脂肪变性, B组大鼠出现以中、重度为主的弥漫性肝细胞脂肪变性 (P0.01) 。B组脂变肝细胞极度肿胀呈圆形, 细胞核明显偏移, 体积较正常明显增加, 胞浆内充满大量脂肪空泡, 酷似泡沫细胞, 界限不清, 肝窦狭窄。A组肝细胞脂肪变性明显改善, 只有轻度病变, 无重度病变 (P0.01) (表4、封二图1～3) 。 降糖药的使用 本研究用高脂饮食制作SD大鼠NAFLD模型。该模型大鼠体重、肝重、肝指数增加, 并伴有肝脏脂质增加和脂肪变性, 同时存在糖、脂代谢紊乱。 噻唑烷二酮类降糖药物罗格列酮通过激动外周组织过氧化物酶增生物激活受体γ (PPAR-γ) 活性, 使葡萄糖转运子4 (GLUT-4) 数量增加, 并更多地转运到细胞膜, 使在相同胰岛素浓度下有更多葡萄糖进入细胞, 增加胰岛素敏感性, 减轻胰岛素抵抗。双胍类降糖药二甲双胍抑制肝葡萄糖生成和肝糖输出, 增加胰岛素敏感性, 减轻胰岛素抵抗。这两种药物一般不会产生低血糖。有研究表明NAFLD是代谢综合征重要组成部分, 而胰岛素抵抗是代谢综合征发病关键因素。我们发现对于脂肪肝大鼠, 应用罗格列酮和二甲双胍联合治疗后大鼠肥胖程度改善、肝重和肝脏在体重中所占比列下降, 肝脏脂变减轻, 肝脂含量下降, 血脂紊乱改善。A组大鼠无低血糖和肝功能异常, 实验结束时均