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组蛋白去甲基化酶4与药物靶标 核小体是染色物质的基本组成单位，由8个聚合体组成，包括核心组的蛋白ha、hb、h3和h4，以及由146个颗粒和循环1.75周期的146bna组成。组蛋白氨基末端可发生乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等多种修饰,影响染色质结构,调控基因转录,其中组蛋白甲基化是组蛋白主要的修饰形式之一。甲基化组蛋白与不同效应蛋白协同参与调控异染色质形成、X染色体失活、特定基因转录调节、基因组完整性及细胞发育等多种生物学效应。组蛋白甲基修饰是甲基化酶和去甲基化酶动态相互作用的结果。最近研究表明组蛋白甲基化异常可导致基因错误表达,引起发育异常、代谢紊乱、疾病甚至肿瘤的发生。本文就组蛋白去甲基化酶4(lysine-specific demethylase 4,KDM4)家族的结构、作用机制、在疾病发生发展进程中的生物学功能及特异性抑制剂开发的最新研究进展作一综述。 1 甲基化修饰 组蛋白去甲基化酶作用位点主要为组蛋白H3上的赖氨酸(K)残基,包括H3上的K4、K9、K27和K36。通常H3K4、H3K36位点甲基化修饰介导基因转录活化,H3K9、H3K27的甲基化修饰则介导转录抑制。目前已知有两大类组蛋白赖氨酸去甲基化酶家族:一类属于氨基酸氧化酶家族,包括赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine-specific,demthylase1,LSD1/KDM1A)和LSD2(KDM1B);另一大类是含Jumonji C(JmjC)结构域的组蛋白去甲基化酶。这类去甲基化酶需要二价铁离子(Fe2+)和α-酮戊二酸为辅助因子,通过羟基化作用使组蛋白赖氨酸去甲基。在人类基因组中含有32个JmjC家族成员,其中24个证实有去甲基化酶活性,根据功能和不同的结构域组合又可细分为7个亚家族(KDM2-8)。 2 km4基因表达 KDM4是最大的JmjC去甲基化酶亚家族之一,在人类基因组中含有6个KDM4基因(KDM4A-F)。KDM4A-C,基因编码的蛋白相对分子质量大约130×103大小,分别还有1个JmjN和1个JmjC功能域,2个PHD和2个Tudor功能域;而KDM4D和KDM4E编码的蛋白缺少PHD和Tudor功能域,大小只有前3个成员的一半(图1)。KDM4E最近才被证实是一个功能基因,和KDM4E结构类似的KDM41F是个假基因。KDM4A-C能催化去除H3K9和H3K36三甲基和二甲基(me3/me2)标记,而KDM4D只能催化去除H3K9me3/me2,标记,KDM4E则可催化H3K9me3和H3K56me3甲基基团的去除。KDM4各个成员在机体不同组织中表达水平不同:KDM4A-C在正常人体组织中广泛表达,在脾脏、卵巢及结肠有高表达;KDM4D和KDM4F在睾丸中高表达,在其他组织则较低或几乎无表达。 KDM4参与调控正常发育过程,KDM4的双纯合子敲除果蝇个体在二龄幼虫期就死亡;KDM4杂合子敲除果蝇DNA对紫外光照射则更加敏感;敲除KDM4基因的线虫出现生殖细胞凋亡以及DNA复制速度降低;条件敲除心脏特异KDM4A转基因小鼠会促进心肌肥厚性刺激的反应;乳腺上皮细胞敲除KDM4B会延迟乳腺发育。KDM4还参与发育过程中维持胚胎干细胞中染色体结构开放状态;诱导Oct4(POU class 5 homeobox 1)、Sox2(sex determining region Y-box)2和Myc(v-myc avian myelocytomatosis、viral oncogene homolog)等多能性因的表达,调控胚胎发育过程中细胞分化的类型等。另外最新研究发现KDM4B和KDM4C在胚胎干细胞的自我更新和诱导多能干细胞的产生中具有各自独特的,但又相互配合的重要作用。 3 km4的活性 自2006年KDM4被证明以来,研究人员对KDM4的活性进行了充分地鉴定,并发现KDM4在肿瘤及其他疾病的发生发展过程中可发挥重要的作用。下面就KDM4家族各成员与疾病特别是在肿瘤发生发展中的作用作一简述。 3.1 km4a在医学方面的表达 许多研究表明KDM4A在多种肿瘤中都有异常扩增或高表达,并可促进肿瘤细胞的侵袭性生长和转移。分析1 770个8类肿瘤患者组织样本后,Black等在18.7%的肿瘤中发现KDM4A基因拷贝的异常扩增;在卵巢癌,高达46%样本中有KDM4A的扩增;基因拷贝数变化直接决定KDM4A蛋白表达的增加或减少,而KDM4A过度表达会导致(1q12、1 q21以及Xq 13.1特定位点基因拷贝数增加,但许不会引起全基因组染色体不稳定。Black的研究成果揭示组蛋白去甲基化酶异常表达可诱导包含原癌基因特定基因位点的拷贝数增加,为肿瘤细胞基因拷贝数变异提供一新的的分子机制Ding等发现KDM4A可改变转录因子激活蛋