人工虫草菌丝体石油醚抗辣瘀证豚鼠心脏毒性及抗氧自由基作用研究.docxVIP

人工虫草菌丝体石油醚抗辣瘀证豚鼠心脏毒性及抗氧自由基作用研究 甘草是一种宝贵的补充剂。近年来, 对其化学成分和药理活性进行了广泛的研究, 证实其具有明显的抗心律失常及抗心肌缺血损伤作用。为了寻找抗心律失常的有效部位,我们通过氯仿诱发小鼠心律失常等病理模型筛试了人工虫草石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、乙醇提取物及水提取物的抗心律失常活性,发现石油醚提取物作用较强。因此, 本文对人工虫草菌丝体石油醚提取物部分进行了进一步的研究,观察其抗哇巴因所致豚鼠心脏毒性与抗氧自由基的作用。 1 材料表面 1.1 实验动物 豚鼠,体重200~300 g,雌雄各半,由中国药科大学实验动物室提供。 1.2 提取石油醚提取物 人工虫草菌丝体,购自河北长天保定药业有限公司,石油醚提取物(Petroleum ether extract from cultural mycelium, PE)采用索氏提取器以石油醚(AR,30~60℃)提取24 h,提取液至无色, 将提取液减压浓缩后得到石油醚提取物, 收率为9.5%;水提取物(Water extract from cultural mycelium, WE) , 人工虫草菌丝体经有机溶剂脱脂后, 用蒸馏水反复煮提4~5次, 浓缩, 真空干燥得到水提取物;哇巴因(Ouabain), E.Merck公司;苯妥英钠(Phenytoin sodium, Phe),江苏盐城制药厂;SOD与MDA测试盒, 南京建成生物制品研究所。 2 方法和结果 2.1 表石油醚提取物对小鼠口服药物治疗的影响 豚鼠随机分组,设立溶媒对照组,受试药两剂量组,石油醚提取物100 mg/kg与200 mg/kg,水提取物1.0 g/kg与2.0 g/kg组,阳性对照为苯妥英钠25 mg/kg。以2 ml/100 g ig给药后1 h,乌拉坦(1.2 g/kg)ip麻醉,仰位固定,用HL-2型恒流泵以0.12 ml/min速度自股静脉恒速注50μg/ml哇巴因(即6μg/min)。滴注过程中SB-42型示波监视器监视心电活动,记录Ⅱ导心电图,以心电停止30 s视为动物死亡,记录哇因引起豚鼠室性早搏(VP),室性心动过速(VT),室性颤动(VF),死亡所用的剂量。结果表石油醚提取物100 mg/kg及200 mg/kg均可显地提高哇巴因所致豚鼠室速、室颤及死亡所用剂(P0.05,P0.01),未见水提物的显著性差。苯妥英钠抗室早、室颤及死亡能力均大于石油提取物,抗室速能力稍逊于石油醚提取物200mg/kg组(见表1)。 2.2 不同给药时间对图12型恒流泵sod活性和mda含量的影响 豚鼠分组及剂量设置情况同上(水提物只设2000 mg/kg组)。以2 ml/100 g ig给药后1 h,乌拉坦(1.2 g/kg)ip麻醉,仰位固定,颈动脉插管,取血约1.5 ml,记为0 min。用HL-2型恒流泵以0.12 ml/min速度自股静脉恒速滴注50μg/ml的哇巴因。分别在给哇巴因后5 min,10 min,15 min取血。滴注过程中用SB-42型示波监视器监视心电活动。所取血液离心后,取血清测定SOD活性与MDA含量。测定方法参见文献。结果表明石油醚提取物100 mg/kg及200 mg/kg组在给予哇巴因后15 min均可显著地提高SOD活性(P0.05);石油醚提取物200 mg/kg组在给予哇巴因后10 min、15 min可显著降低MDA含量(P0.05,P0.01),100 mg/kg组可降低给予哇巴因后10min时的MDA含量。未见水提物的显著性差别(见表2、表3)。 3 对心肌细胞过氧化作用 近年来,虫草在心血管系统中的作用正越来越受到重视。动物实验已证实,冬虫夏草有抗心律失常,扩张冠状动脉,改善心肌缺血,降低心肌耗氧量及抗氧化等作用。细胞水平研究也证实冬虫夏草可显著的减轻乳鼠心肌细胞缺氧再给氧时细胞内脂质过氧化作用。本实验结果表明石油醚提取物可显著提高哇巴因所致豚鼠心律失常和死亡剂量,说明本品可对抗哇巴因的心脏毒性。随着自由基医研究进展,人们越来越关注过氧化脂质(LPO)氧自由基所造成的组织损伤。SOD等可有效地除自由基,减少LPO的生成,而MDA是LPO代谢产物,故MDA可作为反映心肌细胞脂质氧化水平的指标。人工虫草石油醚提取物可效的降低MDA含量,并一定程度上可提高SOD的活性,提示虫草石油醚提取物具有较强的氧化作用,值得进一步深入研究和开发。