蒙古绵羊β-防御素-1（SBD-1） cDNA的扩增与组织表达.pdfVIP

第 39卷 第 5期 内蒙古师范大学学报 (自然科学汉文版) V0I．39No．5 2010年 9月 JournalofInnerMongoliaNormalUniversity (NaturalScienceEdition) Sept．2010 蒙古绵羊 j3一防御素一1(SBD一1) cDNA 的扩增与组织表达 包图雅 。，曹贵方 ，杨银凤 ，杨国奇。 (1．内蒙古农业大学 动物组织胚胎与发育生物学教研室 ．内蒙古 呼和浩特 010018；2．内蒙古医学院基础医学院， 内蒙古 呼和浩特 010059；3．内蒙古 自治区团委 ．内蒙古 呼和浩特 010020) 摘 要 ：为 了获得蒙古绵羊8一防御素一1(SBD-1)的cDNA序列，从蒙古绵羊瘤 胃的上皮组织中提取总 RNA， 采用反转录 PCR(RT-PCR)技术扩增蒙古绵羊 SBD-I的部分 cDNA，结果扩增 出eDNA300个碱基．该 eDNA包 含由 192个碱基组成的开放读码框 (ORF)，该 ORF编码 64个氨基酸 的前原防御素．为 了检测 SBD-ImRNA在 蒙古绵羊体 内可能的表达器官，通过 RT-PCR方法研究了SBD-1基 因在蒙古绵羊各组织 中的表达分布 ，结果显 示 ．该基因在整个消化道 (除直肠外)、气管、子宫、脾脏等管状器官 内的黏膜层和脾脏 内均有表达 ，而在所检测的 实质性器官 内，如心脏 、肝脏 、肺脏 、肾脏 、淋巴结 、膀胱、卵巢等 中没有表达． 关键词 ：蒙古绵羊 ；RT-PCR；组织表达 ；t?-防御素 ；cDNA 中图分类号 ：Q786 文献标识码 ：A 文章编号 ：1001-8735(2010)05-0500-05 防御素是广泛分布于生物界的富含半胱氨酸的阳离子抗菌活性肽 ，在机体防御体系中具有重要的作用． 传统的抗生素对机体均有不同程度的毒副作用，而且致病菌几乎可对现有的所有抗生素产生耐药性．与传统 抗生素相 比，防御素有着特殊的毒性机理 ，它依靠静 电作用附着在靶细胞表面，形成跨膜离子通道 ，使靶细胞 由于内外离子交换失衡而死亡口]．由于防御素具有特殊广谱抗菌活性机理 ，使病原微生物对其不易产生耐药 性 ，因此在医药开发和动植物抗病育种等方面都具有广泛的应用前景与较高的应用价值． 本研究选择蒙古绵羊的瘤 胃作为组织原料 ，提取瘤 胃的总 RNA，并设计一对特异性引物对 SBD-1进行 RT—PCR扩增 ，获得 SBD一1的cDNA序列 ，使用总 RNA提取技术与 RT-PCR技术检测了蒙古绵羊各组织 器官中SBD—l的表达，旨在为了解绵羊体内的黏膜防御机制奠定基础 ，并为防御素在医药及畜牧业 中的应 用和推广起到积极促进的作用． 1 材料与方法 1．1 试验动物及其组织 成年蒙古绵羊 3只(均为母羊)，从 内蒙古锡林郭勒盟购得．蒙古绵羊屠宰后立 即刮取绵羊舌 、食管、瘤 胃、皱胃、网胃、瓣胃、十二指肠、空肠、回肠 、结肠 、直肠 、气管、膀胱 、子宫的黏膜层，切取适量 的蒙古绵羊心 脏 、肝脏、肺脏、肾脏、卵巢、脾脏、淋巴结 、卵巢等组织，立即冻人液氮中，备用． 1．2 主要仪器与试剂 Eppendorf5417R低温高速离心机 ，德 国生物公司生产 ；RTC一100PCR仪 ，美 国MJ生物公司生产； DYY一Ⅲ型稳压稳流电泳仪，北京六一仪器厂生产 ；TanonGis一1000凝胶成像分析系统 ，天能科技 (上海)生 物公司生产． 总 RNA提取试剂盒 、一步法反转录 PCR试剂盒 、琼脂糖 、溴乙锭 ．均购 自Promega公司．DNAMarker 为 DL2000(分子量为 2000，1000，750，500，250，120)，购 自大连宝生物公司． 收稿 日期 ：2009—12—27 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目30460093)；内蒙古高等学饺科学研究重点领域资助项 目(ZL010144) 作者简介 ：包图雅(1978一)，女(蒙古族)，内蒙古通辽市人 ，内蒙古医学 院讲师 ，博士 ，主要从事组织胚胎学与发育生物学研究 第 5期 包 图雅 ：蒙古绵羊 8