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进出口食品中茶多酚的检测方法 （茶及茶制品除外） 高效液相色谱法 编制说明 编制单位：广东出入境检验检疫局 北京出入境检验检疫局 编 制 人：付登洲等 2011年07月19日 一、任务来源 本标准是根据国家认证认可监督管理委员会2009年下达的第二批出入境检验检疫行业标准制（修）订计划《》出入境检验检疫局(Tea ployphenol，简称TP)是一种新型的、安全无毒的天然抗氧剂，是茶叶中特有的主要组成，具有高效的抗衰老、消除自由基、抗辐射、抗癌、降血脂等药理功效。茶多酚是一种多羟基酚类物质，约占茶叶干重的20～30％，具有极强的抗氧化和抗自由基的功能。 茶多酚的主要成分有儿茶素组成，约占茶多酚总量的60％～80％左右，包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表没食子儿茶素（EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)及表儿茶素(EC)。其中EGCG含量最高，约占儿茶素的50％左右。 儿茶素分子结构上的羟基(-OH)起到供氢(H)体的作用，与脂肪酸中的游离基相结合而中断脂肪酸氧化的连锁反应，能抑制氢过氧化物的形成，起到了抗氧化作用。 2.茶多酚的使用情况 茶多酚无毒副作用，对人体无害，食用安全。对高纯度(含量大于90％)茶多酚类(TP)的急性毒性试验、蓄积性试验和致突变试验结果表明，TP作为食品添加剂是较安全的。急性毒性试验结果为小鼠口服LD50=2496±326 mg/kg。蓄积性试验表明，有中等蓄积性。Ames试验，骨髓PCE微核率的测定，骨髓细胞SCE的测定，果蝇SLRL诱变性试验等遗传毒理试验均为阴性。以0.1％浓度饲喂小鼠六周后，小鼠的血红蛋白、红细胞数、白细胞数、体重、肝重、胸腺和脾脏的细胞数与正常对照组比较，雌雄小鼠均无显著差异。肝、脾、胸腺等器官体重比与对照组比较也无显著差异。慢性毒性试验表明饲料中TP含量为0．1％时，对果蝇寿命无不良影响。 茶多酚能抑制油脂酸败，因此可作为抗氧化剂在食品加工业和饲料工业中得到应用。1989年中国食品添加剂学会将茶多酚列入GB 2760-1989食品添加剂使用标准，这是迄今为止唯一被列入我国食品添加剂使用标准的天然添加剂。 3.现行的茶多酚的最大使用限量标准 尽管文献报道茶多酚对人体健康危害不显著，并因此认为茶多酚在食品卫生方面无重要意义，但是 基本不含水的脂肪和油 0.4 以油脂中儿茶素计 方面米面制品 0.2 以油脂中儿茶素计 糕点 0.4 以油脂中儿茶素计 复合调味料 0.1 以油脂中儿茶素计 三、标准编制依据和原则 本标准根据GB/T 1.1-2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则》、GB/T 20001.4-2001《标准编写规则：第4部分：化学分析方法》的要求编制完成。 适用性原则：标准中的技术内容具有可操作性，便于标准的使用和推广。 先进性原则：适合我国进出口食品检测需要，完善进出口食品添加剂检测技术，尽量与国际先进检测技术接轨，提升我国相关检测方法标准的技术水平。 四、工作概况及标准主要内容 1、工作概况： 2010年2月，认监委下达关于标准制订的通知； 2010年4月-7月，检索国内外相关文献和标准，确定标准的适用范围和技术指标； 2010年8月-12月，通过对收集到的资料文献进行研究，确定实验方案，购买试剂和标准品； 2011年1月-4月，建立和优化仪器检测条件，进行数据统计，形成标准初稿； 2011年 5月-9月，形成征求意见稿。 2011年10月-2012年1月，形成送审稿。 2、标准主要内容： 茶多酚的主要成分是儿茶素，而儿茶素的主要组分有表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表没食子儿茶素（EGC）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）及表儿茶素（EC），因此本标准采用高效液相色谱法对进出口食品中的表没食子儿茶素没食子酸酯、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯及表儿茶素进行检测。标准的主要内容包括：适用范围、检测步骤、结果计算和精密度等。 五、技术路线的确定及结果验证 1、标准适用范围 参照GB 2760-2007《食品添加剂使用卫生标准》限量要求，本标准拟适用于植物油、方便米面制品、糕点、调味料等食品。 2、前处理对结果的影响 试验分别采用甲醇、乙腈、乙醇做为提取液对试样中的儿茶素进行提取，结果发现，用甲醇提取时，杂质少，不影响结果分析。 对于面包，糕点、方便米面等含有油脂的样品，采用与食用油处理相同的方法，即直接将溶剂与样品混合，然后用旋涡振荡器或超声波振荡的方法混匀，提取，最后用冷冻、离心的方法将样品层与溶剂层分离开。结果发现，直接与样品混合萃取的方法虽然简单，甲醇与油脂也可以很好地分层，但这些样品的基质比较复杂，有的脂肪含量很高，提取液含有不少杂质，对色谱柱影响较大，影响分析结果。对于这些样品在处理时预先采用正己烷先萃取油脂