探针灿烂绿测定核糖核酸地研究.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 JOuRNALOFGUANGXINORMALUNIVERSITY Vol，21 No．2 探针灿烂绿测定核糖核酸的研究 訾言勤，王为 (淮北煤炭师范学院化学系，安徽准北235000) 核酸是生物体的重要组成物质，无论动物、植物还是微生物都毫不例外地含有核酸．核酸是遗传信息 的携带者、是基因表达的物质基础，在生物的生长、发育和繁殖等正常生命活动中，核酸有十分重要的作 用，同样与生命的异常情况，如肿瘤发生、放射损伤、遗传疾病等也有密切关系．酸分为两大类：脱氧核糖核 物催化作用，所以对此研究正在成为生命科学和化学学科的重要课题口]．大分子拥有复杂的立体构象、折 叠、螺旋、盘绕等使大分子产生大量的多种次极性键极为接近，同性电荷相互靠近形成很多微电场谷”]．由 于电场力作用，带有电荷的小分子探针被吸附到微相电场表面，由于微相空间狭小，探针分子只能单分子 层排列在微相界面上，符合兰缪尔吸附o]．实验发现，pH一7．50缓冲溶液中，探针灿烂绿与核糖核酸作用， 灿烂绿产生显著的褪色作用，建立了测定核糖核酸含量的新方法．吸光值与核糖核酸含量在0～1．2 mg／1， 范围内呈线性关系，相关系数R一0．995． 1实验部分 1．1仪器与试剂 计(上海第二分析仪器厂) 量浓度为2 0 mg／I。的工作溶液；灿烂绿溶液：称取2．000g灿烂绿，用去离子水溶解稀释配制成0．004％ 的溶液；BritonRobinson(B 制，pH--6．oo～8．50．实验中所用试剂均为分析纯，水为二次去离子水． 1．2实验方法 于25 ml，B mI，比色管中依次加入2．6mI，灿烂绿溶液，2．0mI。核糖核酸(酵母)溶液和1．5 R缓冲 溶液(pH一7．50)，以去离子水稀释至刻度，混匀后放置20min，用1cnl比色皿在624 nm波长下测定吸光 良 2结果与讨论 2．1最佳波长的选择 灿烂绿溶液有两个吸收峰，一个在紫外光区，^一300nnl，另一个在可见光区，2--624nm．灿烂绿核 广西师范大学学报(自然科学版) 第21卷 糖核酸结合物最大吸收位于624nm．吸收光谱无红移，但624nrn处吸光度显著降低．实验选择^= 624nm处为测量波长． 2．2酸度的影响和缓冲溶液的用量 、 本实验选用pH一7．50的B—R缓冲液进行实验．缓冲液用量在2．o～4．0mI。有最大且稳定的吸光度，考 mI。． 虑到总体积的影响，实验选用缓冲液用量为2．6 2．3灿烂绿的用量 实验表明，体系中灿烂绿浓度太高，试剂空自的吸光度太大而不易于比色测定，而太低则测量的线形 范围偏窄，本实验灿烂绿的浓度选定为0．004％，在此条件下，灿烂绿的用量在2．6mI．有较大且稳定的哎 mI．． 光度，选择灿烂绿溶液的用量为2．6 2．4静置时间的影响 核糖核酸(酵母)溶液在o～4。C下保存，在室温下长时间放置易变质，且随着温度的升高变质速度加 静置时间为Z0rain． 2．5 T作曲线及样品测定 核糖核酸浓度在0～1．Z0 数0．995．对酵母中核糖核酸进行分析，并进行加标回收实验，测得的含量为0．1 32mg／I。，回收率 104．3％． 参考文献 [13张昌颖．核酸生物化学人民卫生出版社 G