SiRNA干扰Notch信号通路胞外分子Fringe对哮喘时T细胞分化的影响.pdfVIP

中华医学会呼吸病学年会-2011(第十二次全国呼吸病学学术会议)论文汇编 壁报交流 余培养孔中的细胞移去转染复合物，重悬于CRPMI一1640继续培养。5．Westernblot检测Rfng蛋白 X 抑制率：取3 106细胞为一个样本，分别设空白对照组，脂质体组，阴性SiRNA组和特异SiRNA组。 蛋白变性，在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中上样分离蛋白，然后转移至PVDF膜上，5％脱脂奶粉封闭 剂盒进行发光，Bio-rad Image X l细胞悬液， 殖活力：细胞按照1 106／ml重悬于CRPMI一1640培养液中，在96孔板中每孔加入IOOu 1PBS 单抗)、PHA组(加细胞和PHA)，每组设立四个复孔。96孔板离心去上清后每孔加入lOOp 吸光度。细胞增殖活力计算方法如下：细胞增殖活力(％)=100％，对照组细胞的增殖活力为100％．7． 和CD28单抗刺激(浓度分别为5．Opg／ml和2．Op Prism 统计学处理：以Graphpad5．0软件进行统计分析，实验数据用mean±sd记录，组间比较使 用成组t检验和方差分析(ANOVA)，PO．05差异有统计学意义。 结果1．大鼠肺功能测定：记录吸入氯化乙酰胆碱(Mch)前后的气道阻力(RAT)及肺动态顺应性值 (Cdyn)，以吸入Mch后大鼠的气道阻力或肺顺应性与吸入Mch前的基础气道阻力或肺顺应性的比 值来表示的气道阻力和肺顺应性变化情况。两组大鼠RaT较吸入Mcb前的基础值均有一定程度的增 加，而两组大鼠Cdyn较吸入Mch前均有一定程度降低。与对照组相比，哮喘组RaT实测值／基础值 显著升高，而哮喘组Cdyn实测值／基础值比值显著降低。2．肺泡灌洗液和血清中细胞因子检测：与 正常对照组肺泡灌洗液比较，哮喘组细胞数目明显增加。与正常对照组比较，哮喘组血清中，IL一4 平均显著升高，而IFN—Y水平显著降低。3．大鼠肺组织HE染色：两组大鼠肺组织病理切片比较， 可见到哮喘组支气管粘膜存在着不同程度的炎性改变，包括气道上皮的破坏，气道壁增厚，管壁黏 细胞：免疫磁珠分离的C04+Z淋巴细胞上流式细胞仪鉴定，CD4+T淋巴细胞的纯度大于95％。台盼蓝 荧光的考虑SiRNA转染入细胞，转染效率在60％左右。流式细胞仪检测转染效率也在60％左右，结果 ±0．083倍(pO．001)，结果见图3。Western 结果见图3。收集培养上清液，较空白组比较特异SiRNA组中IL一4、IL一5浓度降低，较空白对照组 比较，特异SiRNA组中IL-12、IFN-y浓度升高，结果见图6。 中华医学会呼吸病学年会-2011(第十二次伞国呼吸病学学术会议)论文汇编 擘报交流 结论支气管哮喘是一种多基因遗传的复杂性状疾病，CD4+T淋巴细胞在哮喘的发病中起着重要的作 直接调节配体诱导的Notch信号通路。前期实验结果表明，在哮喘大鼠模型肺组织CD4+T淋巴细胞 抑制Rfng后呈现相反的Thl极化。这可能是哮喘发病重要机制之一。但LTYang等人的实验认为 化向Thl，挽救Thl／Th2的失衡，可能可以作为哮喘治疗的一个新的靶点。 慢性烟曲霉暴露对哮喘大鼠气道MUC2表达的影响 高福生，高艳艳，刘美娟，刘永全 潍坊医学院附属医院呼吸科261031 目的研究长期吸入烟曲霉菌(Aspergillus 的影响。 或0．9％生理盐水lOOM／次，每周2次。测定大鼠的基础气道阻力和气道阻力变化率，ELISA法测定 BALF中IL-13水平，RT-PCR法检测肺组织MUC2mRNA水平，免疫组织化学染色测定气道上皮细胞 姗C2表达强度。 结果C5组大鼠基础气道阻力为(1-0l±0．23 BALF中IL-13为(197．24±20．12 cmH。0·ml～·S～、(49．90±3．62)％、 表达强度(A值)为(