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发酵豆粕和酶解鱼粉对刺参免疫力影响 　　摘要：研究在饲料中按一定比例添加发酵豆粕和酶解鱼粉对刺参幼苗（Apostichopus ja ponicus）酸性磷酸酶（ACP）、碱性磷酸酶（AKP）、溶菌酶（LSZ）、超氧化物歧化酶（SOD）活性的影响。于投喂后第60d后检测ACP、AKP、LSZ与SOD活性。结果显示，总体上分析用发酵豆粕替代豆粕比用酶解鱼粉替代鱼粉对刺参幼苗ACP、AKP的影响要显著。单独分析单一因素，各添加组ACP、AKP活性较不添加组均有不同程度的升高，其中用发酵豆粕替代100%大豆粕组与用酶解鱼粉替代50%鱼粉组效果最佳。发酵豆粕组与酶解鱼粉组对LSZ活性的影响没有显著差异。其发酵豆粕各个替代组较不替代组LSZ的活力都有不同程度的升高，其中替代75%组最为明显（P0.05）。酶解鱼粉各个替代组较不替代组也有不同程度的升高，但差异不显著。总体上分析发酵豆粕组与酶解鱼粉组对SOD活性的影响没有显著差异。两者不同替代组较不替代组SOD的活性都有不同程度的升高，但都不显著。研究表明发酵豆粕和酶解鱼粉替代饲料中的大豆粕和鱼粉对刺参幼参的免疫力都有不同程度增强作用。 　　关键词：刺参幼苗；发酵豆粕；酶解鱼粉；酸性磷酸酶（ACP）；碱性磷酸酶（AKP）；溶菌酶（LSZ）；超氧化物歧化酶（SOD） 　　1 材料与方法 　　1.1 实验材料 　　实验所用的刺参平均体重为（3.4±0.26）～（4.5±0.26）g/头。投喂人工配合饲料，基础配方见表1。室内饲养期间用遮光板控制光照强度，水温人工控制，饲养期间平均水温变化在（13.0±0.5）～（15.0±0.5）℃之间。 　　酶解鱼粉的制备参考Buchmann等和Mohr的方法，采用双酶（胰蛋白酶和木瓜蛋白酶）降解法。以进口鳕鱼为原料酶解获得水解产物干燥而成。通过测定α-氨态氮含量（甲醛滴定法），最终计算得蛋白水解度在60%，粗蛋白含量为65.0%（占干物质），粗脂肪的含量为5.2%（占干物质）。 　　发酵豆粕制备参照HongKJ的方法。干燥的豆粕浸泡60min，在温度为60～70℃蒸汽罐里煮1h，然后在室温下冷却1h，接种枯草芽孢杆菌和嗜酸乳酸杆菌进行发酵，发酵产物在50～60℃干燥3d，粉碎使用，粗蛋白含量43%。 　　1.2 实验设计 　　1.2.1 实验条件 饲养实验将240头刺参分为16组，每组15头称重后随即装入带有编号的16个养殖水箱中（90L/箱），编号分别为1～16号。将编号水箱围养殖池（60m3）圆形排列，向池中加水至池中水面低于箱中水面3～5cm，打开水阀使池中形成定向水流。控制水位使各箱水温相差不超过0.3℃，且水箱中水温与池中水温差距在0.5℃以内，保证实验水箱中的水温相对恒定。养殖海水为经沉淀过滤的海水，由泵房每天监测调节水温，将养殖池水温控制在13～15℃。每天下午14：30开始吸底，换水1/3，换水后进行投喂饲料，饱食投喂，投喂量在5%～10%（吸底时有残余饵料）。视水质情况5～7d刷洗一次水箱。饲养期间DO≥4.0mg/L；NH4+-N≤0.1mg/L；pH=8.2～8.3，饲养期间不充气。 　　1.2.2 实验分组 用发酵豆粕以不同比例（0%，50%，75%，100%）替代刺参基础饲料中的豆粕，用酶解鱼粉以不同比例（0%，25%，50%，75%）代替饲料中的鱼粉。发酵豆粕各组分别记录为a1、a2、a3、a4组，酶解鱼粉各组分别记录为b1、b2、b3、b4组。基础饲料配方如表1。实验采用正交试验的方法以减少试验的单元数。实验设计为二因素四水平的正交实验，所以采用L16（45）正交表。实验饲料的分组方案和正交实验表，见表1、2和表3。 　　1.3 样品制备 　　饲养实验结束后，实验刺参幼参经3d停食处理后，收集刺参，对每个实验单元的幼参进行称重。然后取样后于冰浴中，用注射器从腹部插入海参体内，小心拉动注射器进行抽取，每个个体抽取海参体腔液2mL。离心（12000r/min，4℃，20min），取上清液备用，4℃保存。 　　1.4 测定方法 　　1.4.1 SOD活性测定 采用的连苯三酚自氧化法。向内径1cm比色杯中分别加入3mL磷酸钾盐缓冲液，20μL酶粗液，10μL邻苯三酚。在320nm处，每隔30s记录吸光值，连续读数90s。以10μL邻苯三酚混合3mL磷酸缓冲液测定连苯三酚自氧化速率，自氧化速率控制O.060～0.070A/min之间。 　　酶活单位定义：每毫克蛋白每min抑制邻苯三酚自氧化速率达50%的酶量定义为一个酶活单位，以U表示。 　　式中：U?mL-1：SOD酶活力单位； 　　AA320：连苯三酚自氧化速率； 　　△A’320：样液抑制连苯三酚自氧化速率； 　　V’：反应液总体积，mL；