不同浓度的胎牛血清对骨髓间充质干细胞纯度及周期的影响-口腔临床医学专业论文.docxVIP

安徽医 安徽医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 英文缩略词表 英文缩写 英文全称 中文全称 GDNF glial cell line-derived neurotrophic factor 胶质细胞源性神经营养因 子 MSCs mesenchymal stem cells 间充质干细胞 BMSCs bone marrow mesenchymal stem cells 骨髓间充质干细胞 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 OD optical density 吸光度 BDNF brain-derived neurotrophic factor 脑源性神经营养因子 NGF nerve growth factor 神经生长因子 不同浓度的胎牛血清对骨髓间充质干细胞纯度 及周期的影响 中文摘要 目的 比较含有体积分数为 0.10，0.15，0.20 的胎牛血清（fetal bovine serum FBS ） 的完全培养基对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs）纯度及细胞周期的影响，寻求适宜干细胞培养 的 FBS 浓度。 方法 用颈椎脱臼法处死 SD 大鼠，采用全骨髓贴壁分离培养大鼠 BMSCs。实验分为 A、B、C 三组， FBS 体积分数分别是 0.10、0.15、0.20 的完全培养基培养的 BMSCs， 比较这三组细胞在第 2、3、4、5 代的 CD45、CD29、CD90、CD44 的表达情况；收 集 A 组 P3 细胞，加成骨诱导液，用茜素红检测钙结节的形成结果；消化 A 组 P3 细胞，用 3 种不同浓度的完全培养基连续培养 4 d，用流式细胞仪测其在培养后的 24、48、72、96 h 的细胞周期；收集 P3 BMSCs 制备细胞悬液接种到 6 块 96 孔板， 每块板接种的 BMSCs 分别用 FBS 体积分数是 0.10、0.15、0.20 的完全培养基进行 培养，每天取 1 块板用 CCK-8 检测其吸光度（OD）。 结果 CD45 分子阴性，CD29、CD90、CD44 分子阳性，3 种完全培养基培养的 BMSCs 的表面标志物在前 2 代时差别较大，但在 P3、P4 时差别已较少，P4 时，均可以获 得较纯的 BMSCs；A 组 P3 细胞经过成骨诱导后发现有钙结节的产生；细胞周期结 果显示，在同一时间点，G0/G1 期：A、B、C 三组随着胎牛浓度的增加，G0/G1 期 降低且无差异；G2/M 期：在培养后的 24 h，A、B、C 三组有差异（P0.05，F=12.412）， 但随着时间的延长，差异消失；S 期，三组均无差别；S+G2/M 期随胎牛浓度的增 加而增高。细胞活力结果显示，在 24 h 时 A、B、C 三组的 OD 值依次增大，有差 异统计学意义（P0.05，F=5.002），随时间的延长三组之间差异无统计学意义。 结论这 3 种培养基在第 4 代均能获得较纯的 BMSCs；细胞周期及活力结果显示，3 种完全培养基均能促进 BMSCs 的增长，三组之间差异无统计学意义。体积分数为 0.10 的 FBS 已满足 BMSCs 的分离和扩增，要想在短期内获得较纯的 BMSCs,原代培 养使用体积分数为 0.15，传代用 0.10 的 FBS 完全培养基。 关键词 骨髓间充质干细胞；胎牛血清；表面标志；成骨诱导；细胞周期； The Effect of Different Concentrations of Fetal Bovine Serum on Bone Marrow Mesenchymal Stem Cell Purity and Cycle Abstract Objective To compare the influence of three kinds of complete media with 0.10,0.15,0.20 fetal bovine serum(FBS) on purity and cycle of rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs)cultured in vitro and to seek suitable FBS concentration for the cultivation of the stem cells. Methods SD rats were executed by cervical dislocation method and used whole bone marrow adherence to isolate rat BMSCs. Experiment was divid