不同给药途径对鼠的溃疡性结肠炎模型的疗效比较及其机制研究-外科学专业论文.docxVIP

华中科技大学博士学位论文 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 7 7 第一部分 溃疡性结肠炎模型的建立 摘 要 目的：建立一种能直接将 5-ASA 灌入病变部位的大鼠溃疡性结肠炎模型。 材料和方法：雄性 SD 大鼠 72 只，随机分为 TNBS/ethanol 造模组、模型组及正常组， 每组设 24 只大鼠。造模组及模型对照组大鼠的盲肠插入并固定一根软管，通过大鼠 的皮下穿出于颈上皮肤固定以便灌药。距盲肠约 6cm 结肠，夹闭约 2cm 的肠管，用 1ml 注射器注入 5％ 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS w／V)按 100 mg／kg 加入等体积的 50%的乙醇造模，2min 后放开。模型对照组注入等量的生理盐水。观察各组大鼠的粪 便、精神状态和进食情况，并每日称体重。分别于模型诱导后 1、3、7、14 天后处死 大鼠，对病变部位行肉眼评分，留取血清，分离结肠组织，制作病理切片，HE 染色 及进行相关的分子生物学检测 结果：TNBS 造模组在造模后第 1 天表现明显的肠道稀便和血便，持续约 8 天，造模 后体重明显减轻，持续 8-10 天缓解；造模后第 3 和 7 天可以观察到肠壁明显增厚、炎 症和溃疡，病理学检查可见黏膜及黏膜下层有大量中性粒细胞及淋巴细胞、巨噬细胞、 纤维细胞浸润，14 天肠道的炎性水肿消退，表现为大量的淋巴细胞浸润，肉芽组织及 隐窝脓肿形成。MPO（myeloperoxidase）活性值及 IL-1β（interleukin-1β）、TNF-α（tumor necrosis factor）、IL-6（interleukin-6）炎症因子在血清和病变肠组织中第 1 天即开始 升高，第 3 和 7 天达到峰值，第 14 天有明显下降。手术对照组在造模后第 1 天部分 稀便，第 2 天即恢复正常。正常组大鼠一切正常。 结论：TNBS 诱导的大鼠溃疡性结肠炎的模型已经建成，其溃疡和炎症及相关的检测 指标表现为一个由急性炎症向慢性炎症动态变化的过程，能维持一段较长的时间，盲 肠置管对造模死亡率没有明显影响，可直接将药物注入大鼠盲肠，且病变范围较稳定， 降低了个体差异性导致的模型不稳定，可作为 IBD 局部给药治疗研究的有效模型。 关键词：2，4，6-三硝基苯磺酸 溃疡性结肠炎 IL-1β TNF-α IL-6 35 35 第二部分 不同给药途径对鼠的溃疡性结肠炎的疗效比较 摘 要 目的：观察并比较通过置管灌注 5-ASA、美沙拉嗪（艾迪沙）灌胃、5-ASA 灌胃对 2， 4，6-三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎大鼠的疗效。 材料和方法：70 只 SD 大鼠，按照随机原则分为假手术组（A），模型组（B），5-ASA 肠内给药组(C)，美沙拉嗪灌胃组(D)，5-ASA 灌胃组(E),每组 14 只，造模方法同第一 部分。成模后，假手术组、模型组大鼠给与生理盐水（2ml，2 次/天），5-ASA 肠内给 药组及灌胃组给与 5-ASA（2ml，2 次/天）（100mg/kg）,艾迪沙灌胃组给与艾迪沙（2ml， 2 次/天）（100mg/kg）。共 7 天。每日记录体重变化。用药 7 天后各组大鼠进行心脏采 血，留取血清，分离结肠组织，制作病理切片，HE 染色及进行相关的分子生物学检 测。 结果： 1．与模型组相比较，5-ASA 肠内给药组及艾迪沙灌胃组结肠黏膜大体形态学损伤评 分及组织学评分均明显下降，且 MPO 活性、免疫组化评分、组织中 IL-1β、IL-6、 TNF-αmRNA 表达及血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 含量均明显下降 (P0.05)。5-ASA 灌胃组上述指标则无明显下降（P＞0.05）。 2．与 5-ASA 灌胃组相比较，5-ASA 肠内给药组及艾迪沙灌胃组结肠黏膜大体形态学 损伤评分及组织学评分均明显下降，且 MPO 活性、免疫组化评分、组织中 IL-1β、 IL-6、TNF-αmRNA 表达及血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 含量均明显下降 (P0.05)。 3．与艾迪沙灌胃组相比较，5-ASA 肠内给药组结肠黏膜大体形态学损伤评分及组织 学评分均明显下降，且 MPO 活性、免疫组化评分、组织中 IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA 表达及血清中 IL-1β、IL-6、TNF-α 含量均明显下降 (P0.05)。 结论：肠内直接灌注 5-ASA 对 2，4，6-三硝基苯磺酸诱导的大鼠溃疡性结肠炎的治 疗作用强于艾迪沙灌胃及 5-ASA 灌胃的治疗作用。 关键词：5-ASA；溃疡性结肠炎； IL-1β；IL-6；TNF-α；艾迪沙 62 62 第三部分 HPLC 法测定大鼠结肠组织、血清及粪便中 5-ASA 的含量 摘 要 目的：应用高压液相色谱法测定鼠