葛根素对小鼠D3胚胎干细胞的肝细胞定向分化能力的影响及其机制-外科学专业论文.docxVIP

华中科技大学硕士学位论文 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 3 PAGE 3 前 言 人类的肝细胞在受到外伤或毒性损伤后具有显著再生功能（Columbano A et al., 1996; Michalopoulos GK et al., 1995; Thorgeirsson SS et al., 1996）。然而， 肝脏在受到持续性损伤后会发生不断地纤维化而最终失去其基本功能。目前， 对各种肝脏疾病的终末阶段，最佳的有效治疗方法为肝脏移植。然而，肝脏 供体来源地缺乏使得肝脏移植的临床应用受到了很大的限制。因而寻求更好 的移植供体的来源，成为了目前需要解决的关键问题之一。 胚胎干细胞的起源与发展使细胞移植逐步取代器官移植的呼声越来越高 （Thomson JA et al., 1998; Reubinoff BE et al, 2000）。胚胎干细胞在其分化发 育过程中可分别分化成中胚层、内胚层和外胚层的各种组织细胞（Lowry WE et al., 2008; Thomson JA et al., 1998）。其中，肝细胞起源于前肠内胚层（Meng G et al, 2008; Zorn AM et al., 2007），其前体细胞成肝母细胞或肝始基细胞 （hepatoblast）表达α-甲胎蛋白（α-fetoprotein）, 白蛋白（albumin），delta样 激酶（delta like kinase），细胞骨架蛋白19（CK19）, 和Epcam等（Zhang L et al., 2008; Tanimizu N et al., 2003; Tanimizu N et al., 2004）。而成肝母细胞向肝 细胞分化过程受到多种信号转导因子的调节，包括actinin A, TGF-β, HNF-6， BMP4和OCt-2等（Clotman F et al., 2005; Clotman F et al., 2002）。研究证明， 抑制TGF-β的活性可促进肝细胞的分化，而抑制BMP的活性抑制肝细胞的分 化（Ewa Wandzioch and Kenneth S. Zare , 2009）。 随着肝细胞移植取代肝脏器官移植治疗肝脏疾病的终末阶段的可行性得 到越来越广泛的证实，如何获得高产量的肝细胞也成为众多研究的目标 （Saito K et al., 2006; Tsukada H et al., 2006）。一般广为接受的是在胚胎干细 胞培养过程中在培养基中加入特定的诱导因子，包括 aFGF、BMP-4 及 OSM 等（Saito K et al., 2006; Tsukada H et al., 2006; JIN Li-fang et al., 2009）。然而， 这些诱导因子多价格昂贵，会使肝细胞的大量生产与临床应用成本过高。有 些或许并不适用于患者。这都有碍于它们在临床上的广泛应用。因而，更有 效更安全的促进肝细胞分化方案，将是使细胞移植由实验室走向临床的关键 一步。近来，有些中药被证明能够促进各种干细胞系向神经细胞的定向分化 （Hu J et al., 2006），因而中药具有促进临床上细胞治疗的疗效的潜能。 葛根素为由豆科植物野葛或甘葛藤根中提出的一种黄酮苷，具有舒张血 管平滑肌的作用，因而可以改善器官血液灌注以及微循环。研究发现，在疾 病状态中它可以通过影响多种转录因子的表达（吴国琳 et al., 2008；张平 et al., 2008; 陈珍旭 et al., 2006; 李长天 et al., 2006 ) 而可能影响胚胎干细胞的 分化能力。因此本课题将研究中药对胚胎干细胞向肝细胞定向分化的影响， 揭示其影响机制，为胚胎干细胞基础上的肝细胞移植更有效的应用于临床提 供重要的实验室证据。 材 料 与 方 法 材 料 一、主要仪器和设备 HF safe 生物安全柜 上海力申科学仪器有限公司 二氧化碳培养箱 HERA cell 150 德国 Heraeus 公司 荧光倒置显微镜 ECLIPSE TE 2000-S 日本 Nikon 公司 流式细胞仪 BD 公司 高速冷冻离心机 Biofuge primo R SORVALL 公司 MJ Mini Gradient Thermal Cycler 美国 Bio-Rad 公司 BioPhotometer eppendorf 美