体外超声显像及治疗视网膜母细胞瘤应用载单宁酸铁和紫杉醇相变型纳米粒的实验研究.docVIP

体外超声显像及治疗视网膜母细胞瘤应用载单宁酸铁和紫杉醇相变型纳米粒的实验研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：体外超声显像及治疗视网膜母细胞瘤应用载单宁酸铁和紫杉醇相变型纳米粒的实验研究 1 1、材料与方法 2 2、结果 6 3、讨论 8 文2：红毛毡提取物体外抗肿瘤的实验研究 9 1 材料和方法 9 2 结果 12 3 讨论 12 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 体外超声显像及治疗视网膜母细胞瘤应用载单宁酸铁和紫杉醇相变型纳米粒的实验研究 文1：体外超声显像及治疗视网膜母细胞瘤应用载单宁酸铁和紫杉醇相变型纳米粒的实验研究 视网膜母细胞瘤(retinoblastoma， Rb)为儿童最常见原发性眼内恶性肿瘤[1，2]，目前临床常用影像学检查方法有CT、MRI、超声及光学相干断层扫描(ophthalmic optical coherence tomography， OCT)等，治疗方法包括化学治疗(简称化疗)、放射治疗及手术等，各有其不足[3，4，5]。纳米技术用于治疗肿瘤高效而安全[6]。单宁酸(tannic acid， TA)为多酚化合物，可通过绿色合成途径与Fe3+合成具有强黏附能力的光热材料单宁酸铁(FeIII-tannic acid， FeⅢTA)[7]。全氟戊烷(perfluoropentane， PFP)沸点低(29℃)且易相变，可促进药物释放，同时增强超声显像效果[8]。紫杉醇(paclitaxelaclitaxel，PTX)为常用化疗药物，将其与纳米技术结合可获得更高运载效率，提高肿瘤部位药物浓度，增强治疗效果[9，10]。本研究以FeⅢTA、PTX、PFP相结合制备光响应性PLGA纳米粒，并体外评估其超声显像及治疗Rb效果。 1、材料与方法 主要材料 羟基端乳酸/羟基乙酸共聚物(PLGA-COOH，分子量12 000 Da，聚合比50∶50，上海丽昂化学有限公司)，PTX(上海金穗生物科技有限公司)，PFP(Strem Chemicals公司)，TA(Sigma-Aldrich公司)，六水三氯化铁[Iron(Ⅲ)chloride hexahydrate，FeCl3，赛默飞世尔科技有限公司]，聚乙烯醇(polyvinylalcohol，PVA，Sigma公司)以及异丙醇、二氯甲烷、琼脂糖、RPMI1640培养基和胎牛血清、细胞增殖及毒性检测试剂盒CCK-8(上海纪宁实业有限公司)、活/死细胞双染试剂盒(荧光探针细胞染色，上海复申生物科技有限公司)。Y79细胞系(人Rb细胞系)、人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell，HUVEC)由重庆医科大学超声影像学研究所提供。 主要仪器 Sonics Materials声振仪，磁力搅拌器，低温离心机，Olympus光学显微镜，ZetaSIZER3000HS马尔文粒度仪，Htachi H-7600透射电子显微镜，Agilent Cary 3500紫外可见分光光度计，Shmadzu LC-2-1-A HT高效液相仪(日本岛津公司)，808 nm激光仪，热成像仪，Esaote Mylab 90型彩色超声诊断仪(探头频率5～9 MHz)，ELX800酶标仪，蔡司激光共聚焦显微镜LSM800等。 制备纳米粒 以双乳化法制备PLGA/PTX/PFP纳米粒，将50 mg PLGA和5 mg PTX加入2 ml二氯甲烷中并充分溶解。加入200μl PFP，冰浴下乳化5 min(声振、停止间隔5 s)，再加入4% PVA溶液5 ml，再次乳化5 min(声振、停止间隔5 s)。加入2%异丙醇溶液10 ml，加磁珠冰浴搅拌6 h，经超纯水离心、洗涤3次，获得PLGA/PTX/PFP纳米粒。取1 mg PLGA/PTX/PFP纳米粒均匀重悬于2 ml超纯水，依次加入10μl TA溶液(40 g/L)和10μl FeCl3溶液(10 g/L)，充分混合均匀，经超纯水洗涤、离心3次，完成FeⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒制备。 测定相关表征 以光学显微镜观察纳米粒大小、分散性及相变特性，马尔文粒径分析仪检测其粒径、分布及电位。采用紫外分光光度计检测 g/L PLGA/PTX/PFP及不同浓度(、、、 g/L)FeⅢTA/PLGA/PTX/PFP纳米粒的吸光度。以透射电子显微镜分析纳米粒的结构。配制不同浓度(、、、、、μg/ml)PTX，用高效液相色谱仪绘制PTX标准曲线(色谱柱:Welch-C18， mm×250 mm，流动相:甲醇∶水=77∶23，波长227 nm，流速:1 m