抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定.pdfVIP

抗坏血酸含量及抗坏血酸过氧化物酶活性的测定 一、抗坏血酸含量的测定 还原型抗坏血酸 （AsA）可将铁离子还原成亚铁离子，亚铁离子与红菲罗啉（4，7-二苯基-4， 10-菲罗啉，BP）反应，形成红色螯合物。对534nm 波长的吸收值与AsA 含量正相关，故可用 比色法测定。脱氢抗坏血酸 （DAsA）可由二硫苏糖醇 （DTT）还原成 AsA。测定AsA 总量， 从中减去还原型AsA 即为DAsA 含量。 1.仪器设备 离心机、分光光度计、研钵、试管。 2.操作方法 1）制作标准曲线：配制浓度为2，4，6，8，10，12 和14mg/L 的AsA 系列标准液。各取 1.0ml 于试管中，加入 1.0ml5%三氯乙酸 （TCA），1.0ml 无水乙醇，摇匀。再依次加入0.5ml 0.4%H PO -乙醇，1.0ml 0.5%BP-乙醇，0.5ml 0.03%FeCl -乙醇，总体积5.0ml。将溶液置于30℃ 3 4 3 下反应90min，然后测定OD 值。以AsA 浓度为横坐标，以OD 值为纵坐标绘制标准曲线。 534 5