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硝酸还原酶的提取和活性测定 硝酸还原酶是植物氮代谢中十分重要的一个酶。其催化的反应方程如下： 硝酸还原酶是个诱导酶。在取材的前一天加50mmol/LKNO 或NaNO 到培养苗的水中就可 3 3 以诱导酶的产生。 1.仪器设备 高速离心机、分光光度计、部分收集器、研钵等。 2.操作方法 1）酶的粗提液：材料可用植物的叶、茎、根，发芽的种子，离体胚和培养的细胞等，以发 芽3～5d 的小麦幼苗叶片提取较为简便。剪取材料，洗净吸干并切成小块、放在研钵中冷冻30min 后加入少许石英砂及磷酸缓冲提取液 （25mmol/L 磷酸缓冲液加1mmol/L EDTA 和10mmol/L 半 胱氨酸，pH8.8），研磨成匀浆 （材料多时可用捣碎机），匀浆用2 层纱布过滤，清液用30000×g 离心15min，得到的上清液即为酶的粗提液。整个过程必须在4℃下进行。 2）酶的活性测定：吸取0.5mlKNO 溶液、0.3mlNADH 和0.2ml 酶粗提液。混合后在25℃ 3 下保温30min。保温结束后，立即加入0.5ml1%氨基苯磺