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异黄酮含量的测定 1.仪器设备 高压液相色谱仪 （HPLC）、紫外检测器等。 2.操作方法 1）色谱条件及测定方法：色谱柱为Nuclecsil Cas柱 （4.6×250mm，5μm），流动相：甲醇：水 （3：2，v/v）用于洗脱化合物1～3。甲醇：水 （1：1，v/v）用于洗脱化合物4～6，柱温为室 温，流速为0.6ml/min，检测波长分别为254nm 和280nm。 -1 -2 线性范围2.5～12.5μg，回归方程C 1.961×10 R-5.968×10 （r 9999），加样回收率96.47%~103.33%， RSD 2.57%~6.52%。 2）标准曲线绘制：准确称取10 羟基-3，9-二甲氧基紫檀烷①、 （3R）-8，2-二羟基-7，4-二甲 氧基异黄烷②、芒柄花素③、8，3-二羟基-7，4二甲氧基异黄酮④、2-羟基-3，4-二甲氧基异 黄烷-7-0-葡萄吡喃糖甙⑤和毛蕊异黄酮⑥ （纯度均在99%以上）各1.00mg，分别用甲醇定容至 2ml。每一化合物分别以5，10，15，20，25μl进样，测得进样量在2.5～12.5μg 之间异黄酮量（X） 与峰面积呈良好线性关系。 3）样品液制备：准确称取黄芪毛状根粉5.00g，置索氏提取器中用80%甲醇10