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《分子生物学实验》课程教学大纲 课程编号：0802012 课程总学时/学分：30/1.5（其中理论0学时，实验30学时） 课程类别：专业必修课 一、教学目的和任务 分子生物学实验部分是与理论教学紧密相连的，所选实验内容皆为分子生物学常用的必须实验，通过实验过程使学生更深入理解、掌握所学的基础知识，提高学生的实际动手操作能力，使理论与实践紧密结合通过本实验课的学习使学生不仅对课本知识进行了验证而且更重要的是使学生掌握分子生物学实验的总体设计思想，学会基因操作的一般方法，培养实验设计能力。 二、教学基本要求 通过实验过程使学生更深入理解、掌握分子克隆所需的基本实验知识，提高学生的实际动手操作能力，使理论与实践紧密结合。先修课程生物化学、遗传学、微生物学。 三、教学内容及学时分配 [实验一] 植物组织总RNA的提取和电泳检测 [实验要求] 掌握Trizol法提取植物组织总RNA的原理和操作步骤，了解总RNA提取的材料处理方法，电泳结果的紫外光观察方法。 [实验学时] 4学时 [实验二] 目的基因的PCR扩增 [实验要求] 掌握PCR操作的基因原理与方法，引物设计原则，反应循环程序的设计方法，反应混合液的配制，PCR产物电泳结果的分析。 [实验学时] 4学时 [实验三] 琼脂糖凝胶电泳、目的片段的回收及与载体的连接 [实验要求] 掌握琼脂糖凝胶电泳的原理及操作方法；学会分析质粒酶切和PCR的电泳结果；掌握回收和连接的基本步骤，连接反应的原理。 [实验学时] 4学时 [实验四] 大肠杆菌感受态细胞的制备 [实验要求] 掌握大肠杆菌感受态细胞的制备方法；学习无菌操作和常用仪器的使用方法。 [实验学时] 4学时 [实验五] 大肠杆菌感受态细胞的转化 [实验要求] 掌握大肠杆菌感受态细胞的转化方法；学习无菌操作和常用仪器的使用方法。 [实验学时] 4学时 [实验六] 质粒DNA的提取 [实验要求] 掌握碱裂解法提取质粒DNA的方法；学会分析质粒DNA的电泳图。 [实验学时] 5学时 [实验七] 阳性重组体的筛选及质粒酶切 [实验要求] 掌握蓝白筛选的原理及阳性重组体的筛选；质粒提取及酶切鉴定，学会分析转化结果。 [实验学时] 5学时 四、推荐教材及参考书目 [1] 魏群．《分子生物学实验指导》．高等教育出版社，2007 [2] 萨姆布鲁克．《分子克隆实验指南》．科学出版社，2003