金属-内酰胺酶的研究进展.docxVIP

金属-内酰胺酶的研究进展 金属脲-内酰胺酶（mll）是一组金属丝，其活性物质为金属离子，应依赖于一些金属离子（主要是zn）。 1 菌株多重耐药铜绿假单胞菌的基因型确认 GIM-1型金属酶是2002年抗生素监测项目,在德国从分离的5株多重耐药铜绿假单胞菌中发现而被命名,是由位于Ⅰ类整合子起始部位的基因盒编码的AmblerB类酶,是惟一一个位于独立的整合子结构的MBL,是MBL中除IMP型、VIM型、SPM型的第四种亚型。 1.1 细菌分离和产金属酶 首先被命名为GIM-1的金属酶来自铜绿假单胞菌73-5671(2002年2-7月由德国分离的5株多重耐药铜绿假单胞菌之一),菌株取自德国一位37岁女性患者,2002年2月因院内获得性肺炎入住ICU病房。所有5株菌均来自呼吸道痰标本,Castanherira等对这5株分离菌进行了详尽的研究,药敏试验显示5株菌的药敏模式很接近,对20种抗生素中的19种耐药(包括所有β-内酰胺类,氨基糖苷类和喹诺酮类抗生素),尤其是亚胺培南、美罗培南、头孢他啶和哌拉西林/三唑巴坦,仅对多黏菌素B敏感。MBL表型筛选试验采用E-test法,结果显示加入EDTA后,MIC值由256μg/mL降到了2μg/mL,5株菌对美罗培南的水解率均下降了85%,提示该5株菌均产金属酶。随后又用PCR扩增IMP、VIM、SPM型基因并进行核酸序列分析,证实这种金属酶是不同于IMP、VIM、SPM型的金属酶,被命名为GIM-1 1.2 kct及k环境kca值的变化 体外药敏试验已证实产生GIM-1的菌株对所有的β-内酰胺类抗生素高度耐药(MIC8~256mg/L)。通过对青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类及克拉维酸等活性位点为丝氨酸的β-内酰胺酶的抑制剂的Km,Kcat及Kcat/Km值进行比较,从而研究GIM-1与IMP-1、VIM-1、VIM-2和SPM-1的不同之处。 Km值代表酶对底物亲和力大小,Km值越大,亲和力越小,反之亦然。Kcat称为催化常数或转化率,表示在底物浓度饱和的情况下,单位时间内每分子酶所能催化反应的次数。其值越大,表示酶的催化效率越高。而Kcat/Km值比单独的Km或Kcat更能客观反映酶的催化效率 GIM-1的酶动力学参数显示,虽然与VIM-1、VIM-2和SPM-1相比,其Km,Kcat及Kcat/Km值与IMP-1的相关参数更接近,但酶动力学特性却表明GIM-1酶与其他B类β-内酰胺酶有相似的活性。当检测青霉素和氨苄青霉素时,发现GIM-1与IMP-1有相似的酶动力学特性;但是当以头孢硝噻吩及头孢呋辛为底物时,二者的酶动力学特性却是不同的(GIM-1的Kcat/Km值分别为0.718和0.040μmol/L/s,IMP-1其值为2.4和2.0μmol/L/s)。GIM-1酶与其他B类β-内酰胺酶不同的是对亚胺培南和美罗培南的水解率和转化率相当(Kcat/Km分别为0.094和0.106μM/s)。总之,GIM-1的Kcat/Km值低表明其对大多数β-内酰胺类抗生素的高亲和力和低转化率。 1.3 酶的发现和新发现 GIM-1具有金属酶αββα的特征性结构,也具有其他金属酶与Zn 与其他重要的MBL基因一样,bla GIM-1是一种新的获得性金属酶,明显不同于IMP、VIM、SPM型酶,GIM-1的发现提示今后可能带来临床治疗问题以及相似菌株的流行。但是,GIM-1不同于IMP、VIM、SPM型酶的是其基因可能是不可转移的,因为在In77整合子中携带有一个22kb长度的质粒,是不可连接的,并且有宿主限制范围。bla 2 鲍曼不动杆菌类整合子基因 SIM-1型金属酶是2005年Lee等在韩国汉城分离的7株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中发现而被命名,是位于Ⅰ类整合子的基因盒中的B 1类酶,是MBL中除IMP型、VIM型、SPM型、GIM型的第五种亚型。 2.1 药物的耐药和药敏试验结果见表1 首先被命名为SIM-1的金属酶来自鲍曼不动杆菌(2003年9月-2004年11月由韩国汉城分离的不同病房的4株亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌),取自汉城第三护理医院肺炎患者的痰(1例)和尿路感染患者的尿样(3例)。Lee等对这4株分离菌进行了详尽的研究,MIC值测定显示此4株菌对亚胺培南和美罗培南的MIC值很低(8~16μg/mL),并有多重耐药表型,对多种抗生素耐药或中敏(包括青霉素类,窄谱和广谱头孢菌素类,所有氨基糖苷类,碳青霉烯类抗生素),而对氨曲南、哌拉西林的MIC值有所改变,对环丙沙星敏感。MBL表型筛选试验用亚胺培南和EDTA-SMA双纸片协同试验 又从同一病房分离了3株产金属酶的鲍曼不动杆菌,均取自尿路感染患者的尿样,药敏试验显示耐药模式和以上4株相似,经PCR扩增和核酸序列分析证实为SIM-1金属酶,