七子白的皮肤用药安全性试验研究.docxVIP

七子白的皮肤用药安全性试验研究 《太平圣辉》中的七子白组作品。 为了正确地评价七子白的安全性, 本试验选取了白色大鼠作为研究对象, 进行了皮肤急性毒性试验、刺激试验和过敏试验, 为临床提供一些理论依据。 1 材料和方法 1.1 药养人员:主药饮片有限公司 白术、白芷、白茯苓、白芍、白僵蚕、白蔹、白芨 (均采购于毫州市伯世信主药饮片有限公司) , 经扬州大学兽医学院中兽医教研室许小琴教授鉴定。所有药物一起粉碎成粉末, 过180目筛子, 备用。 1.2 主试剂 2, 4-二硝基氯代苯 (上海化成工业发展有限公司) , 凡士林。 1.3 主要设备 1.4 测试对象 健康Wistar白色大鼠, 雌雄各半, 由扬州大学比较医学中心提供。 2 考试前准备 2.1 子白膏状药物 七子白用蒸馏水作为溶剂, 将1.1中的七子白粉末配制成0.5g/ml的膏状药物备用;2, 4-二硝基氯代苯配制成1%和0.1%的浓度备用。 2.2 去毛、去毛、皮肤损伤组织 完整皮肤组:于给药前24小时, 用剃毛刀将大鼠背肌对称两侧去毛, 去毛面积约为4×4cm, 若在剃毛过程中皮肤有损伤, 则不能参与完整皮肤组。 破损皮肤组:在完整皮肤组的基础上进行操作, 剃毛区用酒精消毒, 再用磨砂纸打磨, 以渗血为度。 3 试验计划 参考《中药药理研究方法学》 3.1 皮肤急救试验 3.1.1 各组不同高剂量组聚合酶原螯虾皮肤高剂量持续型的单次给药量、七子白完整皮肤、低剂量组各市场的皮肤高剂量组见表1 将30只大鼠随机分为5组, 每组6只 (雌雄各半) , Ⅰ组为空白组、Ⅱ组为七子白完整皮肤高剂量组Ⅲ组为七子白完整皮肤低剂量组, Ⅳ组为七子白破损皮肤高剂量组, Ⅴ组为七子白破损皮肤低剂量组。 3.1.2 动物膏剂的配制 给药剂量Ⅰ组:凡士林;Ⅱ组和Ⅳ组:每只大鼠给予5g七子白配制成的膏剂, Ⅲ组合Ⅴ组:每只大鼠给予1g七子白配制的膏剂;给药方法为将各组对应药物涂于剃毛区, 用一层油纸两层纱布, 再用无刺激的医用胶布固定 (防止大鼠互相舔食以及让药物更好接触皮肤) , 给药24h后洗去药物, 给药一次。 3.1.3 大鼠皮肤急性毒性试验 于洗去药物后1h、24h、48h、72h至第七天, 每天仔细观察大鼠运动行为、皮肤情况、有无死亡及全身毒性反应, 若有死亡需剖解观察脏器是否有病理变化。 3.2 皮肤刺激测试 3.2.1 各半半数并半半数 将30只大鼠随机分为5组, 每组6只 (雌雄各半) ;A组为空白组, B组为七子白完整皮肤组, C组为七子白破损皮肤肤, D组为阳性药物完整皮肤组, E组为阳性药物破损皮肤组. 3.2.2 单次刺激试验 A组:给与凡士林, B组和C组:给予1g七子白粉制成的膏剂, D组和E组:给予1%的2, 4-二硝基氯代苯0.5ml。 给药方法单次刺激试验:给药一次, 给药后用一层油纸和两层纱布胶带固定, 给药24h后用温水洗去药物, 观察记录给药后1、24、48、72h小时至第7天。 多次刺激:按单次刺激试验方法给药, 连续给药7d末次给药后洗去药物并观察7d。 3.2.3 皮肤刺激性试验 单次刺激和多次刺激给药后, 记录大鼠背部皮肤每日的红斑及水肿情况, 记录红斑水肿发生时间大鼠数量及消退时间。按表3-1进行皮肤刺激评分, 计算给组大鼠的刺激平均值, 按表3-2评价各组药物对皮肤的刺激强度。并仔细观察实验期间的大鼠运动行为、皮肤情况、有无死亡及全身毒性反应, 若有死亡需剖解观察脏器是否有病理变化。 3.3 皮肤过敏试验 3.3.1 试验动物组 将18只大鼠随机分为3组, 每组6只 (雌雄各半) , M组为空白组、N组为七子白组、L组为阳性药物组。 3.3.2 苯0.5mol M组:给予凡士林, N组:给予1g七子白粉配制成的膏剂, L组:给予1%的2, 4-二硝基氯代苯0.5ml。 给药方法:按给组对应药物涂于剃毛区, 用一层油纸两层纱布以及无刺激医用胶布固定, 持续6h, 在第7天、第14天分别用同样方法重复一次, 于末次致敏14天后进行激发接触 (M组和N组同3.3.2, L组为0.1%的2, 4-二硝基氯代苯0.5ml) , 6h后洗去药物。 3.3.3 皮肤主动偏敏试验 观察大鼠是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身过敏反应, 按表3-3记录给皮肤过敏反应并计算反应平均值, 根据表3-4计算各组药物致敏率并判断致敏强度 3.4 正交试验结果 采用SPSS 21.0软件对试验数据进行统计分析, 试验数据以“平均值±标准误”表示, 采用F检验对正交试验结果进行差异显著分析, P0.05表示差异显著, P0.01表示差异极显著。 平均反应值=红斑形成总分+水肿形成总分/合计动物数 4 试验结果 4.1 大鼠一般情况 试验结果显示, 在洗去药物后至药