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肾素-血管紧张素系统调节剂对hel细胞增殖的影响 肾素-血管紧张素系统（ras）能调节血压和水电解质的平衡。该系统由血管紧张素原 (angiotensinogen, AGT) 、肾素 (renin) 、血管紧张素 (angiotensin, Ang) 、血管紧张素转化酶 (angiotensin-converting enzyme, ACE) 及各血管紧张素受体组成。近年来研究发现, RAS的2个主要活性成分Ang II及Ang- (1-7) 对细胞增殖及凋亡有调控作用, 恶性肿瘤的发生发展与RAS的异常激活及成分失衡密切相关 真性红细胞增多症 (polycythemia vera, PV) 是一种获得性克隆性造血干细胞肿瘤, 其发病机制为造血干细胞水平发生了JAK2突变, 使得JAK2过度激活下游通路导致细胞恶性增殖和凋亡抑制 材料和方法 细胞培养 HEL细胞由第三军医大学预防系惠赠。HEL细胞悬于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液于37℃及5%CO 细胞凋亡和周期 氯沙坦 (美国默沙东公司) 、替米沙坦 (德国勃林格殷格翰公司) 、阿利吉仑 (瑞士诺华公司) 、Ang- (1-7) (中国吉尔生化有限公司) 。CCK试剂盒 (日本株式会社同仁化学研究所) 。Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒 (美国Bection Dickinson公司) 。PI/RNase流式细胞周期试剂盒 (中国赛默飞世尔科技有限公司) 。MODEL 680酶标仪 (美国伯乐公司) 。Cyto FLEX流式细胞仪 (美国Beckman coulter公司) 。 药物干预组 氯沙坦、替米沙坦和阿利吉仑按10 测定植物生长曲线 取对数生长期的HEL细胞, 每孔100μl接种于96孔培养板中, 每列的第1孔不加细胞, 为调零孔。24h后分别加入5个不同浓度的4种药物, 每个浓度设3个复孔。I组为对照组, Ⅱ-V组为实验组 (分别为氯沙坦、替米沙坦、阿利吉仑、Ang- (1-7) ) 。96孔板每孔加CCK-8 10μl, 混匀, 37℃孵育, 设定时间点为3、6、12和18 d 4个时间点进行筛选浓度。根据实验结果有效药物的最佳干预浓度设定时间点为6、9、12和15 d 4个时间点。酶标仪检测波长450 nm的每孔吸光度值, 求其平均值, 根据吸光度值作生长曲线。根据下列公式计算细胞存活率。 流式细胞术检测各组药物对hel细胞的死亡 取HEL细胞2×10 均数标准差ue0afsd 对所有计量资料行正态检验, 所有数据符合正态分布, 用均数±标准差 (ue0af±SD) 表示。多组比较采用单因素方差分析。所有的数据均通过SPSS 17.0软件进行统计学分析, P0.05为差异有统计学意义。 结果 不同浓度组的药物梯度的测定 10 各组药物对hel细胞生长的影响 10 各组药物对hel细胞周期的影响 10 各组药物对hel细胞死亡的影响 10 ang1-7的降解 循环RAS是由两个轴构成。肾素、AGT、ACE分别由肾脏、肝脏、肺组织分泌后, 肾素将AGT转化为Ang I, ACE将Ang I裂解为Ang II, Ang II通过AT1受体结合而产生收缩血管效应, 此为ACE-Ang II-AT1受体轴;ACE2将Ang II转换为Ang- (1-7) , 后者通过与Mas受体结合而产生与Ang II相反的扩张血管效应, 此为ACE2-Ang- (1-7) -Mas受体轴。此外, Ang I在ACE2作用下, 先生成Ang- (1-9) , 后经ACE转化为Ang- (1-7) , 此为Ang- (1-7) 的次要来源。Ang- (1-7) 的代谢则由ACE降解为Ang- (1-5) 而灭活 既往学者研究发现, PV患者AngⅡ与血管紧张素Ⅱ受体1 (angiotensinⅡtype-1 receptor, AT1R) 的表达是异常增高的 本研究结果显示, 调节RAS的4种药物中Ang- (1-7) 有显著抑制作用, 而ARB仅有轻度抑制作用, 肾素抑制剂几乎没有抑制作用。由图2可以看出, ARB制剂阻断AngⅡ和AT1受体的结合, 将导致AngⅡ向Ang- (1-7) 转化增多, 推断ARB制剂对HEL细胞轻度的抑制作用可能源于Ang- (1-7) 的增多;AngⅠ、AngⅡ分别是Ang- (1-7) 的次要来源和主要来源, 阿利吉仑作为肾素抑制剂, 降低AngⅠ、AngⅡ水平必然导致Ang- (1-7) 的匮乏;结合本研究结果提示RAS中真正对HEL细胞生长起抑制作用的是Ang- (1-7) 。正常的红系造血调控依赖EPO与受体结合活化JAK2而激活下游通路, 引起红系的增殖和分化;而JAK2突变导致异常活化JAK2持续激活下游通路