瑞替加滨中甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的残留溶剂测定.docxVIP

瑞替加滨中甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的残留溶剂测定 硝基溶胶药物的化学名称为n-2-氨基-4-（4-氟苯基）氨基丙烯酸二羟基磺酸盐。这是一种合成氨基吡啶，具有强烈的抗牵张效应。瑞替加滨已经由FDA批准上市, 疗效确凿, 作用机制新颖, 很有可能成为抗癫痫药物中的重磅炸弹级品种 近年来, 顶空毛细管气相色谱技术逐渐普及, 成为药品中残留溶剂检测的首选方法, 而关于瑞替加滨原料药中残留溶剂的测定和控制文献报道很少。参照《中国药典》2015年版四部规定 由于异丙醇与乙酸乙酯的沸点非常接近, 均在80℃左右, 为了达到有效的分离, 采用了程序升温, 在220℃时保持4 min, 进样口温度为200℃, 保证溶媒二甲基亚砜全部被吹出, 不会影响下一次进样的测定, 避免了直接进样时原料药样品对检测的干扰和对色谱柱的污染。所建方法专属性好, 准确度和灵敏度高, 可用于瑞替加滨原料药中有机残留溶剂的质量控制。 1 实验部分 1.1 顶空自动进样装置 气相色谱仪:7820A型, 配有色谱工作站, 美国Agilent公司; 顶空自动进样装置:7694E型, 美国Agilent公司; 电子分析天平:MS405DU型, 德国赛多利斯公司; 二甲基亚砜 (DMSO) :分析纯, 天津大茂化学试剂厂; 瑞替加滨原料药样品:吉林省药物研究院。 1.2 进样温度和平衡时间 色谱柱:DB–WAX 123–7032石英毛细管柱 (30 m×0.32 mm, 0.25μm) ;柱温采用程序升温:初始温度为35℃ (保持0 min) , 以4℃/min升至60℃ (保持0 min) , 以40℃/min升至220℃ (保持4 min) ;进样口温度:200℃;分流比为5∶1;检测器温度:250℃;载气压力:68.95 k Pa (10 Psi) ;顶空瓶平衡温度:60℃;进样环温度:80℃;管线温度:120℃;平衡时间:30 min;进样体积:1 m L 1.3 溶液制备 1.3.1 混合对照品溶液 分别精密称取适量甲醇、异丙醇、乙酸乙酯, 加入二甲基亚砜溶解并稀释, 配制成甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的含量分别为2.923, 4.996, 5.159 mg/m L的混合对照品溶液。 1.3.2 试验溶液 取适量瑞替加滨原料药样品, 精密称定, 加入二甲基亚砜溶解并稀释制得质量浓度约为0.5 g/m L的供试品溶液, 。 2 结果与讨论 2.1 溶剂的选择 溶解性试验表明, 瑞替加滨原料药在二甲基亚砜中溶解良好, 且二甲基亚砜作为溶剂不干扰待检测残留溶剂的测定, 故选二甲基亚砜作为溶剂。 2.2 色谱峰高的确定 精密量取混合对照品溶液5 m L, 置于20 m L顶空瓶中, 密封, 进行试验。考察顶空平衡温度在50, 55, 60, 65, 70℃时3种溶剂色谱峰面积的变化情况。 结果表明, 随着加热温度的升高色谱峰高逐渐增大, 当到达70℃时, 色谱峰高有减小的趋势, 且峰形变差, 拖尾较严重, 综合考虑选择平衡温度为60℃。在顶空平衡温度60℃的条件下, 选择不同加热平衡时间进行试验, 分别考察加热平衡时间为20, 25, 30, 35, 40 min时3种溶剂色谱峰面积的变化情况。结果显示:加热平衡时间小于30 min时, 随着平衡时间的增加, 色谱峰面积逐渐增加;加热平衡时间为30 min时色谱峰面积趋于稳定;加热平衡时间大于30 min时色谱峰面积反而减小。因此选择加热平衡时间为30 min。 2.3 对标准偏差的影响 精密量取混合对照品溶液, 连续进样5次, 记录色谱图, 见图1。 由图1可知, 各溶剂峰均能分开, 峰形良好, 没有杂质干扰。甲醇、异丙醇、乙酸乙酯色谱峰面积测定结果的相对标准偏差分别为1.97%, 1.68%, 2.24% (n=5) 。《中国药典》中对系统适用性有明确要求, 待测物的色谱峰理论塔板数一般不低于5 000, 与其相邻色谱峰的分离度应大于1.5。实验中以混合对照品溶液为测试液, 在优化色谱条件下进样, 甲醇、异丙醇、乙酸乙酯各组分的保留时间分别为1.415, 1.544, 1.936 min;分离度分别为2.98, 6.55, 1.80;理论塔板数分别为17 561, 19 533, 31 330。结果表明建立的分析方法能够满足药典对系统适用性的要求。 2.4 标准工作溶液的制备 精密量取混合对照品溶液0.5, 1, 2, 3, 4, 5 m L置于5个50 m L容量瓶中, 加入二甲基亚砜至标线, 摇匀, 得系列标准工作溶液。分别量取5 m L, 置于20 m L顶空瓶中, 密封, 按实验方法测定。以待测组分的质量浓度X为横坐标, 以峰面积Y为纵坐标进行线性回归。甲醇、异丙醇、乙酸乙酯的线性方程、相关系数及线性范围见表3。由表3可