基于红外光谱和磁共振波谱的漆酶天然介体体系处理木素结构研究.docxVIP

基于红外光谱和磁共振波谱的漆酶天然介体体系处理木素结构研究 油漆是一种双醇氧化机制。在介质和氧气的作用下，纸浆中的残余木材可以氧化分解。具体反应机制如图1所示。但常用的介体主要是合成介体如HBT、ABTS等具有价格高和潜在的毒性等特点,限制了漆酶体系的工业化应用。因此,寻找可替代合成介体的高效、廉价、环保、可再生的天然介体的来源是LMS 漂白技术工业化应用的关键。Camarero等用以紫丁香醛、乙酰丁香醛等作为漆酶漂白的天然介体,采用漆酶/天然介体体系处理桉木硫酸盐浆,使白度由41%ISO增加至67%ISO左右。Moldes等研究发现,漆酶/紫丁香醛体系与漆酶/HBT体系具有相近的催化漆酶脱木素效果。Arzola 等发现紫丁香醛和乙酰丁香酮等天然介体具有与HBT、ABTS 等合成介体相似的电化学稳定性。Caňas 等用对香豆酸等催化漆酶处理废水中的多环芳烃化合物也取得了较好的效果。但关于漆酶/天然介体体系脱除木素的机理鲜有报道,因此研究漆酶/天然介体体系的木素脱除机理,有着重要的理论和现实意义。 我们前期的研究表明,从蔗渣黑液木素降解可得到香草酸、香草醛、阿魏酸、紫丁香醛、丁香醛和对羟基苯甲醛等小分子酚醛类化合物,这些化合物可以作为漆酶脱木素/漂白的天然介体。本文以蔗渣硫酸盐浆为研究对象,以香草醛作为催化漆酶的模拟天然介体,对其进行了漆酶及漆酶/天然介体体系预处理,然后采用酶-弱酸水解两段法分离处理前后蔗渣浆的木素,并对制得的木素样品进行了傅里叶红外光谱(FT-IR)和核磁共振波谱(1H-NMR、13C-NMR)分析,得出漆酶/香草醛体系脱除木素的机理。 1 实验 1.1 漆酶、混合纤维素酶 蔗渣硫酸盐浆为实验室自制纸浆,其kappa值为10.2,白度为38.0%ISO;漆酶和混合纤维素酶分别由宁夏夏盛实业集团有限公司和诺维信(中国)投资有限公司提供,其酶活分别为700IU/L和170FPU/mL; 香草醛购于Sigma-aldrich公司。 1.2 漆酶/香草醛体系预处理 蔗渣硫酸盐浆漆酶及漆酶/香草醛体系预处理是在PARR 4843高压反应釜中进行,而螯合处理和过氧化氢漂白是在塑料袋中进行,具体工艺条件如下: 漆酶预处理:漆酶用量 15IU/g、pH 4、浆浓 10%、温度 50℃、时间 120min、氧压 0.5MPa 漆酶/香草醛体系预处理:漆酶用量 15IU/g、香草醛用量 2%、pH 4、浆浓 10%、温度 50℃、时间 120min、氧压 0.5MPa 螯合处理:EDTA 0.2%、pH 3.0、浆浓 10%、温度 70℃、时间 60min 过氧化氢漂白:H2O23%、NaOH 2%、MgSO40.05%、浆浓 10%、温度 90℃、时间 150min。 1.3 抽提液的制备 首先,将风干的未处理、漆酶预处理及漆酶/香草醛体系预处理的蔗渣浆用苯-乙醇(体积比为2∶1)溶液在索氏抽提器上连续抽提20 h。然后,再根据参考文献提出的方法,采用酶解-弱酸水解的两步法分离三种蔗渣浆中残余木素。最后将得到的木素样品经过乙醚洗涤数次,在40℃条件下真空干燥,即可得到比较纯净的木素试样。 1.4 木材素乙酰化 经纯化的木素样品按照参考文献提出的方法进行乙酰化,得到的乙酰化木素样品主要用于核磁共振波谱分析。 1.5 红外光谱测定木素的光谱 采用KBr压片法,在Nicolet Nexus红外光谱仪上测定木素样品的红外吸收光谱。样品用量为1.5 mg木素/300 mg KBr,测定波数为400～4000 cm-1。 1.6 超声核磁共振谱ds 木素的1H-NMR和13C-NMR分析是在中国科学院广州化学研究所一台德国BRUKER公司生产的DRX-400型400兆超导核磁共振谱仪上进行的。测定条件如下:溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6);外标为四甲基硅烷 TMS;室温。扫描次数分别为32次(1H-NMR)和16500次(13C-NMR)。 2 结果与讨论 2.1 氧化氢漂浆的硬度 实验分别对漆酶和漆酶/天然介体体系预处理的硫酸盐蔗渣进行了过氧化漂白。在没有添加任何介体的条件下,过氧化氢漂白纸浆的白度68.8%ISO;而添加香草醛作为天然介体后,其白度增加了6.4个ISO白度单位,为75.2%ISO。从后面的分析结果可以,因为添加香草醛作为介体后,经漆酶预处理后纸浆中羟基数量较未添加的多,且含有较多的羰基结构,增加了木素与过氧化氢反应的活性,说明香草醛可以作为漆酶预处理的介体。 2.2 红外光谱检测 红外光谱除了用于木素结构和基团的定性分析外,也可用于定量分析各种功能基的变化。红外光谱用于定量分析木素的某些基团时,常用的是基线法。一般研究木素的红外光谱时采用1510 cm-1或1600 cm-1吸收峰为内标,也可以根据实际情况采用