硫酸软骨素的检测方法及比较.docxVIP

硫酸软骨素的检测方法及比较 硫酸软骨素（cs）是d-葡萄糖酸和2-羟色胺-2-脱氧硫酸-d-半乳液糖的基本单位。这是一种由d-1和3糖苷键结合的重糖。CS分子中含有硫酸基与羧基,可与钾、钠、钙离子结合成盐。根据硫酸基团结合的位置不同,CS有A、B、C、D等多种异构体,其结构见图1,以A、C居多。CS有促进细胞增生及存活、调节细胞黏附、保护胃及口腔黏膜、调节血脂及抗动脉粥样硬化、镇痛抗炎、增强免疫、抗凝等作用,在临床上作为药品或保健品用于防治冠心病有一定疗效,还作为抗关节炎药物,不良反应少。CS具有保湿功能,在化妆品领域得到广泛应用。CS有多种检测方法,本文对其进行概括总结。 1 光谱法 1.1 分光光度法 1.1.1 对二甲氨基苯甲醛生缩合反应的研究 部颁药品标准采用Elson-Morgan法测定CS含量,根据CS水解所得氨基葡萄糖与乙酰丙酮发生缩合反应,其产物与对二甲氨基苯甲醛的酸醇溶液呈红色,测定525 nm波长处吸光度。谢继青等认为影响测定的主要因素是乙酰化和显色,对该方法进行了优化。李萍等对测定的时间条件进行了研究,分析时间比原方法缩短一半以上。曾正宏、魏莉分别用该法测定了角膜宁滴眼液及复方硫酸软骨素片中CS含量。 1.1.2 苯三酚试剂合成产物 CS在酸性条件生成糠醛或其衍生物,与间苯三酚试剂反应,产物在554 nm波长处有最大吸收。张华王君等进行了操作条件的优化,测定了角膜宁滴眼液中CS含量。 1.1.3 cs含量的测定 CS中的葡糖醛酸在硫酸的作用下生成糠醛,在咔唑的醇溶液中显红色,在520 nm波长处有最大吸收。Zsadon等对测定条件进行了优化,测定了CS-A的含量。翟咏红等用该法测定了真灵活胶囊(复方制剂)中CS的含量,制剂中的氨基葡萄糖对CS测定无干扰。苏玉永等用该法测定了复方硫酸软骨素胶囊中CS的含量。 1.1.4 cs含量的测定 AHMT作为显色剂,与己糖醛酸或CS显色灵敏。AHMT在碱性溶液中与CS生成紫色衍生物,在540 nm波长处测定吸光度可测定CS的含量。刘坤等利用该法测定了软骨鱼类中CS的含量,并优化了测定条件。 1.1.5 cs与改性反应 阳离子染料带正电荷,与CS的硫酸基和羧基作用生成复合物,在特定波长处随CS浓度的增加吸光度降低。高贵珍等利用CS与天青A作用,在625 nm波长处测定了中药复方制剂中CS的含量。施文健等将CS与碱性艳蓝BO反应,在570 nm波长处测定了CS含量。杜美菊等将中性红作为光谱探针,在533 nm波长处测定了康得灵复方片中CS的含量。陈媛媛等将维多利亚蓝B与CS反应,在614 nm波长处测定了康得灵注射液中CS含量。丁雅勤等将吖啶橙作为光度探针与CS反应,在492 nm波长处测定了CS含量。李明明等将结晶紫与CS相互作用,在583 nm波长处测定了硫酸软骨素注射液及片中CS含量。Pospichal等通过CS与天青B反应,用流动注射分析法以分光光度检测器测定了CS含量,并在静态及流动状态下分别进行了研究。 1.1.6 透明质酸盐及cs的含量测定 CS中的葡糖醛酸以水溶的碳二亚胺为偶联剂,与2-硝基苯肼反应后形成肼的衍生物,在530 nm波长处有最大吸收,Murata 等利用该法测定了透明质酸盐及CS的含量。 1.2 子与硫酸根沉淀 茅力等将鲨鱼软骨粉水解后,加入已知量的钡离子使硫酸根沉淀。将样品用水浸泡后做浸泡对照,用原子吸收光谱法测得游离硫酸根,从而算出水解出的有机硫酸根的量,再换算出CS含量。 1.3 cs-a注射液和甲基紫作用 Li等将CS-A与结晶紫相互作用生成复合物,其RRS光谱比CS-A及结晶紫的RRS光谱明显增强。其复合物在328 nm波长处产生新的散射光谱,检测了CS-A注射液及CS样品中痕量的CS-A。李继桃等将CS与甲基紫相互作用,最大RRS峰在505和661 nm波长处,分别用两种波长测定了硫酸软骨素注射液中CS的含量。蒋治良等利用CS与溴代十四烷基吡啶作用,在360 nm波长处测定了CS样品及硫酸软骨素注射液中CS的含量。 1.4 硫酸软骨素注射液 将CS加到氧化还原体系Ce(SO4)2-Na2SO3-H2SO4中后,发光强度较空白时明显增强,李艳平等根据此原理测定了硫酸软骨素注射液中CS的含量。 2 色度法 2.1 反相hplc法 2.1.1 cs和盐酸氨基葡萄糖含量的测定 Tyler等在195 nm波长处测定了CS含量。牛增元等在195 nm波长处同时测定了CS和盐酸氨基葡萄糖的含量。林燕飞等以蒸发光散射检测器测定了复方氨基葡萄糖片中CS含量,能避免盐酸氨基葡萄糖的干扰。潘自国等在209 nm波长处测定了CS总量,并同时测定了A、B、C、D等4种异构体的含量。 2.1.2 cs含量的测定 鲍伦军等将CS粗品用硫酸软骨素ABC酶定量酶