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草莓离体培养条件下体细胞遗传变异及控制 在植物组织和细胞的培养过程中，通常会发生细胞克隆化。变异的来源是多方面的。在离体培养条件下的变异主要发生在愈后组织及其继代培养过程中。利用花药培养脱毒菌及外殖体快繁, 可以提高草莓的产量和品质, 但对在离体培养条件下遗传性变异及控制的研究报道不多。本文研究目的是观察在笔者所培养的条件下, 草莓的体细胞染色体数目是否发生变异。 1 材料和方法 1.1 再生植株的培养 草莓幼苗的外殖体, 如茎尖或子叶等, 经组织培养获得再生植株。将再生植株继代培养, 再转入生根培养基中进行生根培养, 切取茎尖供制片用。根尖的细胞染色体观察的材料来自再生植株继代培养4次, 根部长出小根, 供制片用。观察的品种主要有群众、盛岗、明镜、Sb、A、S4和戈雷拉等。 1.2 侧芽的诱导诱导培养 选取健壮的幼苗, 先在70%的乙醇中过一下, 再投入到0.1%的升汞或10%的漂白粉中处理, 最后用无菌水冲洗几次。擦干后, 在超净工作台上切取茎尖或子叶, 接种在添加BA的MS培养基上进行诱导 (室温25°～28℃, 20～30天) , 产生许多侧芽;再接种至MS分化培养基中继代培养;最后移至添加IBA的1/2MS (或1/2B5) 的生根培养基中, 进行生根培养, 供体细胞染色体观察。 2 根充染色观察 (1) 取材。切取再生植株的幼嫩新鲜的根尖, 用水冲洗, 截取根长2cm。 (2) 预处理。在低温 (3℃以下) 蒸馏水中浸泡两天, 或直接用0.1%秋水仙素溶液处理2～3h。 (3) 水洗固定。用卡诺固定液 (酒精:乙酸=3:1) 固定若干小时 (2h) 。 (4) 分别经95%、70% (可用于保存) 、50%乙醇, 在60℃条件下, 把保存的根尖材料用1N盐酸解离10min左右。 (5) 用4%铁矾媒染40min, 水洗。 (6) 投入苏木精染色液中染色4h以上。 (7) 分开、软化、压片、烤片, 进行镜检。 注:可利用醋酸洋红染色和苏木精染色观察。 (在用醋酸洋红染色的片中, 反差效果不好, 因此改用苏木精染色) 。 3 茎尖细胞染色体数目的变异 (1) 观察草莓再生植株50个茎尖细胞的染色体数目, 出现4种染色体数的变异类型, 变异频率约为20%左右。其中, 2 n=54约占8.4%;2 n=58约占82%。这表明在组织培养条件下草莓的体细胞染色体数目发生了变异。另外还有2 n=50、2 n=52等非整倍体的细胞, 大致变异频率在1%～2%。草莓再生植株茎尖细胞染色体数目的变异及不同染色体数的细胞数如表1所示。 (2) 观察草莓再生植株的50个根尖体细胞染色体数目, 出现4种染色体变异类型。其变异频率为12%, 其变异频率比茎尖材料的体细胞材料变异频率低。其原因可能是茎尖材料的再生植株经过8次继代培养, 而根尖材料的再生植株只经过4次继代培养。另外, 2 n=54染色体数的细胞, 变异频率高, 与茎尖体细胞染色体数的变异一致。 草莓再生植株根尖细胞染色体的变异及不同染色体数的细胞数如表2所示。 (3) 组织培养得到的再生植株往往由于受到培养条件中各种因素的影响, 使染色体数目发生种种变化。是否继代培养的代数越多, 其变异频率也会相应提高, 我们应做检查。另外, 染色体数目的变化是以染色体数目减少的细胞居多数。形成这种变化趋势的原因, 将是值得认真研究的问题。