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海水养殖牙技术 鱼是分布在中国沿海地区的大型冷温性鱼类。因其个体大、生长快、肉质细嫩、高蛋白、低脂肪、低热量、含丰富的维生素、口感好等有优点, 深受广大消费者欢迎, 成为我国重要的海水养殖品种。因其具有雌性比雄性生长快的特点, 实现牙鲆全雌化养殖能提高养殖产量20%以上, 对渔民的增产增收、提高经济效益具有十分重要的意义。本文主要介绍了实现牙鲆全雌化养殖的关键技术:人工诱导雌核发育、高温诱导伪雄鱼和低温培育牙鲆苗种。 一、 人工诱导雌性发育 1. 引物对精子诱导的体外发育的影响 俗称假受精, 是一种发育方式, 在这种方式中, 精子虽正常进入激活卵子, 但其细胞核在染色体中很快消失, 并不参加卵球的发育, 胚胎的发育仅受母体遗传控制。 2. 生殖二倍体二倍体 通常使用经过物理或化学方法处理精子, 使其失活后再受精, 然后用人为阻止卵母细胞的第二极体外排, 或抑制第一次有丝分裂等方法获得雌核发育二倍体。 3. 外照射后激活、诱导、复加、冷休克 牙鲆雌鱼成熟的卵子用异源真鲷精子激活。采集成熟的真鲷精液, 用林格氏液稀释50倍, 在30W紫外线灯下照射45秒, 使其遗传物质失活, 然后与牙鲆卵子进行人工“受精”, 卵子被激活。受精3分钟洗卵后放入0℃~2℃海水中进行冷休克处理, 抑制第二极体释放, 使染色体加倍, 形成雌核发育二倍体。45分钟后转入15℃~16℃水中孵化, 卵子正常发育, 但真鲷精子并没有提供任何遗传物质。 二、 高温诱导虚假雄花 1. 假雄花 2. 伪金鱼与普通成虫的配合 用成熟的牙鲆雌鱼卵与经紫外线灭活的异源真鲷精子受精, 再冷休克处理制备牙鲆雌核发育二倍体。孵化后在仔鱼30日龄~100日龄, 利用高温诱导 (28℃) , 则产生伪雄鱼。经过2年~3年的培育, 性腺发育成熟, 能够自然排放正常精子。性成熟伪雄鱼可与普通雌鱼自然交配, 获得优质受精鱼卵。由于伪雄鱼产生的精子染色体全部为X, 普通雌鱼产生的卵子染色体也均为X, 所以上述受精卵的染色体均为XX。即伪雄鱼与普通雌鱼交配可获得牙鲆全雌鱼卵。 3. 光照、温度和时间 分正常和反季节促熟培育。正常促熟培育是当自然水温下降到8℃~9℃时, 停留数十日, 根据生产所需用卵时间, 提前2个~3个月设计控温、控光时间。反季节繁育是在高水温期, 根据生产所需用卵时间, 利用机械制冷或深井水降温, 当开始降温时, 黑暗7天, 然后每天降温0.5℃, 到水温14.0℃, 保持温度不变;光照从每天12小时开始, 采用日光灯照明延长光照时间促进性腺发育。 无论是正常繁育还是反季节繁育, 亲鱼培育都分为饲育期、性腺促熟期和产卵期管理。在饲育期, 亲鱼管理与成鱼养殖相同。在性腺促熟期 (产卵前三个月) 饵料中应添加营养强化剂和维生素, 以满足亲鱼生产精卵的物质需求, 这直接关系到亲鱼精卵质量的好坏, 进而影响到苗种培育的成活率。亲鱼促熟温度应控制在性腺发育适宜温度9~22℃之间, 最好在14℃左右。性腺促熟期可通过控温、控光来决定亲鱼产卵时间, 流水可促进性腺发育。 亲鱼开始产卵后, 饵料中不再添加强化剂, 光照延续促熟期日光照时间。水温控制在12℃~18℃, 最适水温14℃~16℃, 常流水, 一方面流水可以刺激亲鱼产卵, 另一方面也有利于卵子及时溢流到集卵网箱, 避免卵子长时间在亲鱼池滚动, 死卵增多, 卵质下降。牙鲆全雌卵是浮性卵, 产卵期盐度应在27~32, 最好在30以上。光照以不超过2000LX为好, 以免强光惊扰并保持安静, 避免亲鱼受干扰影响产卵质量。 三、 放养密度和放养时间及密度 1. 全雌牙鲆苗种培育的关键是水温的控制, 在30日龄~100日龄牙鲆苗种性腺分化期间, 温度控制在20℃以下, 雌化率可达到90%以上, 如果温度超过20℃, 雌化率随着温度的升高而降低, 到28℃, 雌化率甚至为零。因此, 一般育苗前期要求温度低于20℃, 100日龄后温度可随自然温度的升高而提高。 2. 培育密度:全雌牙鲆苗种培育应有一个合理密度, 太高, 环境条件差, 容易生病死亡;太低, 饵料浪费, 成本增高。由于全雌牙鲆个体整齐, 互相蚕食少, 因此在培育过程中可以保持比普通牙鲆高的培育密度。在水量足, 水质好的育苗室, 初孵仔鱼可放到3万尾/m3~5万尾/m3;仔鱼生长到5mm左右时, 密度控制在1万尾/m3~2万尾/m3;仔鱼附底前, 利用虹吸法把鱼苗倒入新池培育, 密度降低到1万尾/m3~1.5万尾/m3左右;全长18~20mm时, 密度以0.5万尾/m3~0.8万尾/m3为宜;20mm以上的全雌牙鲆苗种密度占池底面积2/3即可, 给苗种预留生长空间。如果水质条件较差, 鱼苗密度就要相应降低, 以免鱼苗生病、死亡。同时, 由于苗种整齐减少了分苗次数, 不仅减少了劳动强