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短链脂肪酸测定方法的研究进展 shortchaafa（scf）是1.6碳链中的有机脂肪酸，主要包括醋酸、丙酸、酰胺、异丙酸、戊酸、异戊酸、己酸和异己酸。其中，醋酸、丙酸和丁酸的总含量最高，约占短链脂肪酸的90%95%，由肠道细菌通过特定的碳分解产生。其他scf只有一个小部分（约5%），其中异丙酸和异戊酸钠等支链短链脂肪酸来源于蛋白质的分解。 SCFA是结肠腔内重要的有机酸阴离子,通过离子或非离子形式被结肠粘膜吸收,是结肠和小肠上皮细胞的主要供能物质.临床研究表明,SCFA能较强地维护肠道形态及功能,并具有一定的治疗作用,通过测定生物基质中SCFA的水平可以整体诊断体内厌氧菌的变化,SCFA的含量也可以反映细菌活性.因此,SCFA的测定对营养、微生物和环境的研究有重要的意义. SCFA含量的早期测定方法是滴定法,该法特异性不强,准确度差.随着色谱技术的发展,气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)以及毛细管电泳(CE)已广泛用于SCFA的测定.但极性大、挥发性强和水溶性大的特点使SCFA难以定量,生物基质的复杂性也更增加了定量工作的难度.目前,原子吸收分光光度法、反相高效液相色谱技术也使用较多,方法也比较成熟. 1 测定短链脂肪酸 1.1 膜法检测血小板中脂肪酸的含量 以气相色谱法测定人血、尿样中的短链脂肪酸,为临床提供一个快速、简便、精确的方法,以利于对糖尿病、脂肪肝、肝性脑病患者等疾病的诊疗效果观察.孙树英等采用10%改性聚乙二醇-20000内加1%磷酸固定液,克服了强极性、易缔合短链脂肪酸的拖尾现象,而且大大提高了分离度,获得了良好的分离结果.对标准液与处理尿样进行测定,结果正常人尿中主要含有乙酸和微量丙酸,当与正常人尿样色谱图呈现差异时,即被认为病理性尿,丙酸峰增大即为丙酸尿症.包娜然采用气相色谱法测定了血小板浓缩液和血清中的短链脂肪酸,所测短链脂肪酸包括乙酸、 丙酸、 丁酸、异丁酸、 戊酸、异戊酸、乳酸、丙酮酸和琥珀酸.血小板浓缩液中主要含有乙酸、乳酸、丙酮酸和珀琥酸,血清中含有乙酸、乳酸和丙酮酸,血清中未测到琥珀酸,血小板浓缩液中的琥珀酸可认为主要是血小板的内容物.血小板计数与乳酸含量成正相关关系.室温下取同体积不同处理时间的血小板浓缩液进行测定,随着保存时间的延长,乳酸含量增加,主要用于预防和治疗血小板减少或功能不良引起的出血,也可用于某些疾病的术前准备.肖殷等用气相色谱法对龈沟液中的短链脂肪酸(SCFA)进行检测并比较SCFA与临床牙周痛变程度间的关系,发现龈沟液中的乙酸、丁酸和异戊酸与牙周痛的严重程度间有较明显的关系,但不能反映正常人与龈点患者间的差别.丙酸能揭示龈史与正常者间的差别,而不能反映龈史与牙周史间的差别,只有异丁酸才能反映牙周组织在不同损伤程度之间的差别.因此对龈沟液中短链脂肪酸的整体检验,特别是异丁酸的浓度是反映牙周痛严重程度的较理想途径.孙晓红等用气相色谱-同位素比值质谱法测定体外肠道细菌发酵产生的短链脂肪酸,所测定的人体肠道发酵产生短链脂肪酸的能力不同,可能与乳糖不耐症状的发生有关,为乳糖不耐症状的发生提供依据. 气相色谱法衍生化简单,仅需把羧酸衍生成酯,故目前许多实验室还在使用,但在实际工作中,由于短链和中链脂肪酸具有挥发和半挥发性质,在衍生化处理过程中,会因液-液萃取操作步骤多而损失,从而使中、短链游离脂肪酸(FFA)不能很好地定量.谭力等采用化学键合相FFAP毛细管柱定量分析人血清中FFA谱,样品无需衍生化直接进样,以庚酸(C7∶0)和正十七酸(C17∶0)为内标,用正己烷-异丙醇(4∶1,V/V)提取血清中FFA后直接进样.结果:除乙酸和丙酸外,其余脂肪酸的回收率在81.08%~118.29%.日内变异系数均小于8.95%,日间变异系数均小于8.47%,用各FFA与内标色谱峰面积的比值对浓度做标准曲线,在0.992 5~0.999 8.该方法简便可靠,符合生物样品的分析要求,可用于生物样品中FFA的测定. 1.2 scfa.n-pcr检测 You等报道了9-(2-羟乙基)咔唑作为荧光试剂与脂肪酸在偶联剂1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)腈胺和碱催化剂4-二甲基氨吡啶存在下反应,产物无需再提取,用乙腈稀释后直接进入液相色谱体系分离检测.该法可同时分析C1~C20脂肪酸,产物稳定,灵敏度高.有时也可不经衍生化而直接采用HPLC法测定SCFA.Stein等用HPLC紫外(UV)检测法测定了生物样品如结肠组织、粪便、唾液、十二指肠液、尿和血浆中的SCFA.样品以2-2-二甲基丁酯为内标,通过真空蒸馏和在碱性条件下冻干浓缩后,在磺酸基聚苯乙烯-二乙烯基苯色谱柱上分离,所得结果与GC所得结果相似.Horspool等用离子交换柱进行分离,采用UV检测器在210 nm波长下测定了马盲肠液中的7种S