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斑马鱼器官发育与再生的研究进展 动物和动物器官的发育和再生不仅是一种重要的生物学现象，而且是许多疾病的发生和发展密切相关的。因此，器官发育和再生的过程和调节机制非常重要。通过对小鼠(Mus musculus)等模式动物的研究科研工作者对于胚胎的早期发育、器官建成、组织再生等过程已有了一定程度的了解。尤其是近年来遗传筛选技术的运用,使得调控发育和再生的分子机制开始被逐步探明。遗憾的是,小鼠等脊椎动物体内发育、再生能力弱且难以进行大规模遗传筛选大大阻碍了科研工作者对于器官发育与再生过程中的细胞来源、命运分化、形态建成等的调控机制的深入认识。因此寻找合适的模式动物来深入探究器官发育与再生的调控机制至关重要。斑马鱼(Danio rerio)的出现为科研工作者深入回答这些问题提供了理想的模型。斑马鱼是原产于印度、孟加拉等国的淡水鱼,属脊椎动物亚门辐鳍鱼纲鲤科,由于其基因序列与人类基因序列保持87%的相似性,近年来被广泛应用与生命科学,尤其是器官发育与再生的研究。关于以斑马鱼为模式动物研究器官发育与再生的综述已多有报道,本综述将着重总结近年来利用斑马鱼研究器官发育与再生所取得的重要进展。 1 本马登鱼作为一种模型动物，其器官发育和再生的优势 1.1 斑马鱼器官发育和再生的作用 斑马鱼在20世纪80年代由Streisinger等带入实验室,在近30年的时间里迅速发展为研究发育与再生的新兴模式动物。不同于小鼠,斑马鱼的受精过程在体外进行,且受精卵发育迅速。研究表明在受精后24 h(Hours post fertilization,hpf),几乎所有的系统都开始了器官发生。受精后5 d(Days pos fertilization,dpf)左右,主要的器官已基本建成并发挥功能。体外快速发育的优势为研究早期器官发生和形态分化提供了便利。另一方面,斑马鱼胚胎透明,便于科研工作者对器官发育和再生的过程进行直接观察]。此外,斑马鱼具有强大的再生能力,它的多个组织和器官如尾鳍、心脏、神经细胞、血管和肝脏等都能再生,为研究器官再生的调控机制提供了巨大优势。显而易见,斑马鱼的自身特点为深入研究器官发育与再生的过程和机制提供了理想的平台。 1.2 斑马鱼横向遗传筛选技术的应用 数十年来,遗传筛选尤其是正向遗传筛选无偏倚地回答了众多生物学现象的调控机制,成为科研工作者揭示调控机理的重要方法。大规模正向遗传筛选需要生物体具有较强的繁殖能力、巨大的后代数量、较短的成熟时间以及较廉价的饲养成本,因此,在小鼠等模式动物中难以实行。斑马鱼强大的繁殖能力、较短的成熟时间和易于大规模饲养的优势恰恰满足了正向遗传筛选的要求。具有噬菌体遗传筛选背景的Streisinger通过遗传学方法率先在斑马鱼中成功创建了色素细胞发育缺陷的突变体“golden”,开创了利用斑马鱼进行正向遗传筛选的新纪元。随后,Nüsslein-Volhard和Driever在斑马鱼中进行了大规模的正向遗传筛选,成功地获得了约4 000个影响斑马鱼早期发育的突变体,这次筛选进一步强化了斑马鱼进行遗传筛选的优势,奠定了斑马鱼作为模式动物的基础。近年来,随着斑马鱼基因组测序的基本完成,寻找特定突变体的靶向基因越来越简单,使得正向遗传筛选技术成为科研工作者利用斑马鱼研究器官发育与再生的首选方法之一。一系列针对特定器官发育与再生的突变体筛选已在多个课题组开展,众多的作用因子被发掘,其中多个是从未被报道过的全新基因,进一步显示了用斑马鱼研究发育与再生调控机制的优势。除此之外,吗啡啉介导基因敲降,尤其是近来基于TALENs、CRISPR/Cas9介导的基因敲除等反向遗传技术在斑马鱼中的成功应用更为科研工作者深入探索重要因子的作用机制提供了巨大优势。与此同时,小分子化合物的高通量筛选在斑马鱼中也蓬勃开展起来,为科研工作者寻找影响器官发育与再生的有效药物,从而治疗相关的临床疾病提供了富有价值的信息。 1.3 活动的图像显示了斑点鱼的独特优势 1.4 斑马鱼的基因组化和基因组化 随着斑马鱼作为模式动物的推广,众多传统和新兴的分子生物学技术如原位杂交、免疫组化、转基因品系构建、深度测序等在斑马鱼中广泛运用并不断成熟。近年来基于特定组织或细胞功能的直接染色技术,如针对肝脏的油红、巨噬细胞的中性红、粒细胞的苏丹黑等的成功运用更显示了利用斑马鱼操作的简便。 2 动物的器官发育采用白马鱼 2.1 神经皮质和神经系统 脊椎动物的中枢神经系统起源于原肠胚时期的外胚层。通过对小鼠等模式动物的研究,科研工作者发现脊椎动物中枢神经系统尤其是脑的建成主要经历以下几个阶段:1)随着原肠胚时期背腹轴极性的建立,神经板首先开始形成;2)神经板形成后其边缘区域会向背侧的中线区域折叠,并不断迁移至背部中线区域融合成管状结构的神经管;3)神经管进一步分化使前脑